[发明专利]一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将猪流行性腹泻病毒的完整的S1蛋白的编码基因或猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p和完整M蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统中得到重组杆状病毒Bv-S1或重组杆状病毒Bv-S1p-M；

S2.将重组杆状病毒Bv-S1p-M或重组杆状病毒Bv-S1进行扩大培养，纯化回收获得S1蛋白或S1p蛋白和M蛋白；

S3.将S1蛋白或S1p蛋白和M蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后即可获得组杆状病毒基因工程亚单位疫苗；

其中猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述疫苗的制备方法，其特征在于，S1所述重组杆状病毒Bv-S1的构建方法为：将猪流行性腹泻病毒的完整的S1蛋白的编码基因克隆到杆状病毒转移载体pFastbac-HTB中，得重组载体pFastbac-HTB-S1；重组载体pFastbac-HTB-S1转化到预含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞中，通过同源重组后提取重组载体，重组载体再转染Sf9细胞产生重组杆状病毒Bv-S1。

3.根据权利要求1所述疫苗的制备方法，其特征在于，S1所述重组杆状病毒Bv-S1p-M的构建方法为：将猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p和完整M蛋白的编码基因克隆到杆状病毒转移载体pFastbac-Dual中，得重组载体pFastbac-Dual-S1p-M；重组载体pFastbac-Dual-S1p-M转化到预含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞中，通过同源重组后提取重组载体，重组载体再转染Sf9细胞产生重组杆状病毒Bv-S1p-M。

4.根据权利要求1所述疫苗的制备方法，其特征在于，S2所述扩大培养为：将密度为1～2×10⁶细胞/mL的重组杆状病毒接毒感染昆虫细胞后，昆虫细胞在含有0.1～0.5%的FBS或BSA的无血清培养基中，28℃培养72h。

5.根据权利要求1所述疫苗的制备方法，其特征在于，S2所述纯化回收为：离心回收S2扩大培养后的昆虫细胞，利用亲和层析介质Ni-NTA进行纯化回收目的蛋白。

6.根据权利要求1所述疫苗的制备方法，其特征在于，S3所述佐剂为油乳佐剂或铝胶佐剂。

7.权利要求1至6任一项所述方法制备得到的猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗。

8.权利要求7所述的猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗在防控猪流行性腹泻中的应用。