[发明专利]一种高纯度磷脂酰胆碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于磷脂技术领域，尤其涉及一种高纯度磷脂酰胆碱的制备方法。

背景技术

磷脂（Phospholipid），也称磷脂类、磷脂质，是含有磷酸的脂类，属于复合脂。磷脂组成生物膜的主要成分，分为甘油磷脂与鞘磷脂两大类，分别由甘油和鞘氨醇构成。磷脂为两性分子，一端为亲水的含氮或磷的尾，另一端为疏水（亲油）的长烃基链。磷脂根据骨架的不同可以分为磷酸甘油脂（glycerolphospholid）和鞘磷脂（sphingolipid）。它们都是极性脂。极性脂由极性部分（叫做极性头）和非极性部分（叫做非极性尾）组成。其中，甘油磷脂又可以根据极性头部集团的不同分为磷脂酰胆碱（Phosphatidylcholines,PC）、磷脂酰乙醇氨（Phosphatidylethanolamine,PE）、磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserines,PS）、磷脂酰肌醇（Phosphatidylinositols,PI）、磷脂酰甘油（PG）、甘油磷脂酸（phosphatidic acid,PA）等。在磷脂当中，PC的极性最强，在pH等于7时，PC分子的N带一个正电荷，硝酸上的O带一个负电荷，整个分子呈现电中性不带电荷，PC的结构式如下：

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目前所报道制备高纯度磷脂酰胆碱的方法主要有溶剂法和柱层析法。溶剂法一般的方法是以丙酮脱油（U.S.Pat.No 3268335），然后在此基础上用低级醇如乙醇提取纯化（U.S.Pat.No 2724649），随后再用其他的混合溶剂进行提纯。溶剂法步骤繁多，所用溶剂种类也多，工业上生产时丙酮得大量使用，安全隐患大。而目前所报道的柱层析法主要有氧化铝法（U.S.Pat.No 4235793,4528139,5453523），大孔树脂层析法（CN102633832）等等，上述方法中氧化铝和大孔树脂对其他的磷脂吸附能力很强，容易形成死吸附，填料再生困难，此外还有其他的分离纯化方法如费用昂贵的超临界流体法以及加入反应试剂后处理难度更大的化学变性方法等等。在工业上规模上生产而言，上述方法都不能更好地简化步骤，简化操作和降低成本。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种高纯度磷脂酰胆碱的制备方法，该方法利用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，不易形成死吸附，易于再生，节省成本，使用溶剂也单一无毒，适合大规模工业生产。

本发明所要解决的第一个技术问题是通过如下技术方案来实现的：一种高纯度磷脂酰胆碱的制备方法，含以下步骤：以低级醇醇溶性粗磷脂为原料，配成醇溶性粗磷脂乙醇溶液，将醇溶性粗磷脂乙醇溶液上样到葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层析柱中，采用高浓度乙醇洗脱后，收集洗脱液，蒸发掉溶剂，即得到高纯度磷脂酰胆碱。

本发明根据醇溶性粗磷脂的组成成分以及结构特点，利用分子量不相同的各组分在葡聚糖凝胶Sephadex LH-20上受到的阻滞作用不同的特点对醇溶性磷脂进行了有效分离纯化，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20不易形成死吸附，易于再生，节省成本，使用溶剂也单一无毒，适合大规模工业生产。

本发明所述低级醇优选为乙醇、甲醇或异丙醇。

本发明所述低级醇醇溶性粗磷脂优选为葵花籽来源醇溶性粗磷脂或大豆来源醇溶性粗磷脂。

本发明配成醇溶性粗磷脂乙醇溶液的浓度优选为20-25mg/mL，其中乙醇的体积百分含量优选为95%以上。

本发明所述葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层析柱在使用前须进行预处理，预处理方法优选为：在室温下，将葡聚糖凝胶干粉浸泡于体积百分含量为50%-60%的乙醇中24-28小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干，随后将凝胶用体积百分含量为97%-100%乙醇置换并溶浆，将溶胀好的凝胶脱气后，根据装柱要求一次性置入柱内，并保持湿态装柱，且避免柱内产生气泡或断层。

本发明所述高浓度乙醇的体积百分含量为95%以上。

本发明醇溶性粗磷脂乙醇溶液的上样量为装柱葡聚糖凝胶总重量的20%-25%。

本发明醇溶性粗磷脂乙醇溶液以恒定流速上样，上样流速优选为3-4mL/min。

本发明采用高浓度乙醇洗脱时以3-5mL/min的流速洗脱。

本发明高纯度磷脂酰胆碱的纯度为85%-90%。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

（1）   本发明中使用的葡聚糖凝胶Sephadex LH-20不易形成死吸附，易于再生套用，洗脱溶剂单一无毒；