[发明专利]庆大霉素JI-20B基因工程菌及其构建与应用无效

申请号：	201310621354.3	申请日：	2013-11-30
公开（公告）号：	CN103740627A	公开（公告）日：	2014-04-23
发明（设计）人：	洪文荣	申请（专利权）人：	福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司
主分类号：	C12N1/21	分类号：	C12N1/21;C12N15/74;C12P19/48;C12R1/31
代理公司：	福州元创专利商标代理有限公司 35100	代理人：	蔡学俊
地址：	350002 福建省福州市鼓***	国省代码：	福建;35
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摘要：
搜索关键词：	庆大霉素 ji 20 基因工程及其构建应用
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【权利要求书】：

1.庆大霉素JI-20B基因工程菌，其特征是：该基因工程菌命名为 Micromonospora purpurea B3P1220(△genB3P/gntJI ) ，保藏编号：CGMCC 8287，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，保藏日期：2013 年9月25日。

2.根据权利要求1所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌，其特征是：在庆大霉素产生菌中灭活genB3-genP/gntJ-gntI基因功能。

3.根据权利要求1所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌，其特征是：构建基因工程菌的菌株为产庆大霉素的所有小单孢菌。

4.如权利要求1所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌的构建方法，其特征是：包括以下步骤：

（1）敲除genB3P基因所需穿梭载体pFD605的构建；

（2）穿梭载体pFD605导入小单孢菌；

（3）敲除genB3P基因单双交换突变株的筛选；

（4）工程菌M.purpurea B3P1220(△genB3P/gntJI )突变株发酵产物的分析。

5.根据权利要求4所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌的构建方法，其特征是：所述的步骤（1）是借助PCR 技术，分别获得 genBP基因上下游片段2275bp和 2310bp，删除 genB3P基因内部875bp左右的保守序列，达到灭活基因功能的目的。

6.根据权利要求4所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌的构建方法，其特征是：所述的步骤（3）双交换阻断株的筛选是根据抗性表型，获得双交换突变株，对突变株在基因水平和DNA水平上进行 PCR 扩增检测和DNA测序验证，从而筛选到特定代谢产物的重组子。

7.根据权利要求4所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌的构建方法，其特征是：所述的步骤（4）发酵产物为变株和亲株代谢产物经MS确认。

8.根据权利要求5所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌的构建方法，其特征是：所述的灭活基因的方法包括基因敲除，基因替换和基因灭活。

9.如权利要求1所述的庆大霉素JI-20B基因工程菌在生产庆大霉素JI-20B组分中的应用。