[发明专利]一种人工DNA分子及表达目标基因的方法

说明书

技术领域

本发明涉及遗传工程技术领域，特别是涉及一种人工DNA分子，及利用该人工DNA分子表达目标基因的方法。 

背景技术

绵羊β-酪蛋白基因在乳腺中高表达，皮肤和有毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes)中也能表达。酪蛋白是绵羊乳中主要的蛋白组份，根据结构划分为4类：α_s1、α_s2、β和κ。乳腺组织中，4种酪蛋白基因mRNA翻译效率不同，α_s1和β的mRNA翻译效率是α_s2和κ的3至4倍。综上所述，β-酪蛋白基因位点是制备乳腺生物反应器的合适靶点。 

为证实β-酪蛋白基因启动子驱动的表达框是否有效，Kolb等(1999)采用乳腺上皮细胞。国内乳腺生物反应器研究方面，也采用乳腺上皮细胞验证表达框的有效性。如果能够在绵羊成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子，检测重组表达框的表达结果，将为绵羊乳腺生物反应器的构建提供直接方便的检测技术。 

发明内容

本发明的目的是提出一种人工DNA分子，及利用该人工DNA分子表达目标基因的方法。 

本发明中术语“TALE”是指转录激活样效应子。 

本发明中术语“TALE-TFs”是指TALE转录因子，即TALE transcription factors。 

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下技术方案： 

能够编码TALE-TFs的人工DNA分子，所述人工DNA分子的碱 基序列为SEQ ID NO.2，能够编码TALE-TF1，所述TALE-TF1能够识别SEQ ID NO.1中的28-48位；或所述人工DNA分子的碱基序列为SEQ ID NO.3，能够编码TALE-TF2，所述TALE-TF2能够识别SEQ ID NO.1中的42-62位；或所述人工DNA分子的碱基序列为SEQ ID NO.4，能够编码TALE-TF3，所述TALE-TF3能够识别SEQ ID NO.1中的56-76位。 

本发明还提供一种表达载体，所述表达载体包含权利要求1所述的人工DNA分子，其能够表达TALE-TF1、TALE-TF2或TALE-TF3。 

本发明还提供一种重组细胞，所述重组细胞是用权利要求2所述表达载体转化的原核细胞或真核细胞。 

一种表达目标基因的方法，包括以下步骤： 

步骤A、将目标基因转入绵羊β-酪蛋白基因，构建含目标基因的绵羊β-酪蛋白基因表达载体； 

步骤B、根据绵羊β-酪蛋白基因启动子靶序列设计TALE排列，并构建表达TALE-TFs的表达载体；其中所述绵羊β-酪蛋白基因启动子靶序列为SEQ ID NO.1中的28-48位，或靶序列为SEQ ID NO.1中的42-62位，或靶序列为SEQ ID NO.1中的56-76位； 

步骤C、用所述含目标基因的绵羊β-酪蛋白基因表达载体和所述表达TALE-TFs的表达载体共转染绵羊成纤维细胞获得转染后的绵羊成纤维细胞。 

进一步，步骤B中所述表达TALE-TFs的表达载体包含SEQ ID NO.2碱基序列，或SEQ ID NO.3碱基序列，或SEQ ID NO.4碱基序列。 

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：为证实重组的表达框是否有效，国内外均采用在乳腺上皮细胞中进行检测。而利用TALE-TFs技术使不表达β-酪蛋白基因的绵羊成纤维细胞能够表达β-酪蛋白基因，也就能够实现用TALE-TFs在绵羊成纤维细胞中激活重组的β-酪蛋白基因——外源整合基因表达框，能够为体外检测重组的β-酪蛋白启动子驱动的表达框提供一种更加方便的检测途径，无需培养乳腺上皮细胞。 

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中： 

图1为绵羊β-酪蛋白基因结构示意图； 

图2为pTY-ShE1LB-2BsmBI-ShE1RB载体结构示意图； 

图3为pTY-ShE2LB-2BsmBI-ShE2RB载体结构示意图；