[发明专利]H1型流感病毒等温扩增检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明公开了一种检测流感病毒的试剂盒，具体地说，是一种检测H1型流感病毒等温扩增的试剂盒。

背景技术

流行性感冒简称流感,主要是指人群中，由普通流感病毒引起的一种病毒性急性呼吸道传染病。流感传染性强，传染迅速，会导致每年的流行，并且历史上每隔几十年会造成流感大流行，在短时间内使很多人患病甚至死亡。流感病毒可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。其特点是容易发生变异，其中甲型流感病毒最容易发生变异，可感染人和多种动物，为人类流感的主要病原，常引起大流行和中小流行。对流感疫情的防控最根本的途径就是早发现、早诊断、早治疗和切断传染源。由此可见，快速灵敏的流感病毒检测技术成为了保护人民生命健康、防控疫情在国内大范围流行的第一道屏障。

现有的快速检测技术主要有两类：第一类为免疫学方法，包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、同位素标记抗体法、乳胶凝集法、免疫传感器法、免疫扩散法及免疫色谱法等；第二类是以核酸为基础的分子生物学方法，主要有核酸探针法和聚合酶链反应法（Polymerase Chain Reaction，PCR）。其中的PCR方法是核酸扩增技术的典型代表，该技术是由美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullin等人于1985年发明的，在过去的二十年里，PCR技术作为分子生物学的核心得到了迅猛的发展和应用，特别是在疾病的临床诊断中，PCR技术以其快速、灵敏和特异的优势，不仅日益取代了传统的诊断方法，而且使以往无法完成的诊断成为了可能。

尽管PCR技术长期以来占据着核酸扩增垄断技术的地位，新近研发的一系列等温核酸扩增检测技术正逐渐成为PCR技术的替代技术而被广泛应用。与PCR技术相比，核酸等温扩增技术的特点是可在特定温度条件下实现核酸的扩增。由于扩增反应的全过程均在同一温度下进行，使它们对仪器的要求大大简化，可通过加热模块、水浴槽等简单的，甚至是非专业的设备完成反应。目前常用的等温技术有以下几类：

1、依赖核酸序列扩增（Nucleic acid sequence-based amplification，NASBA）2、自主序列复制（Self-sustained Sequence Replication，3SR）

3、转录介导扩增（Transcription mediated amplification，TMA）

4、单引物等温扩增技术（Single Primer Isothermal Amplification，SPIA）

5、滚环扩增技术（rolling circle amplification，RCA）

6、环介导的等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）

7、链替代扩增技术（Strand displacement amplification，SDA）

这些核酸扩增技术（PCR技术、等温扩增技术等）的扩增产物为DNA或RNA，与之相对应的扩增产物检测方法主要有以下几种：

电泳分析：常规变性凝胶电泳后用EB或SYBR Green Ⅰ染色，在1%-1.5%琼脂糖凝胶中可以轻易识别。目前该方法已很少使用；

杂交技术：产物通过与特异性探针标记的序列杂交，如32P标记的寡核苷酸序列与扩增产物进行Northern杂交以检测扩增产物；

酶联凝胶（enzyme-linked gel assay，ELGA）技术：用非放射性的辣根过氧化物酶（HRP）标记的探针检测扩增产物。未杂交的探针通过在垂直凝胶电泳中得以分离，然后将凝胶置于有HRP底物的溶液中孵育，则可目测反应结果；

电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）技术：5’端标记有生物素的捕获探针将扩增产物固定在链霉亲和素结合的磁珠上，下游引物的5’末端含有和钉标电化学发光检测探针互补的序列。扩增产物与ECL探针形成复合物，携带该复合物的磁珠被电极的表面磁性捕获。电极上的电压引起电化学发光（ECL）反应。已杂交上的钉标磁珠发出的光和扩增反应产生的RNA扩增产物总量成比例对应，由此可以对扩增产物进行检测和定量；