[发明专利]检测猪瘟病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测猪瘟病毒的RT-LAMP核酸试纸条试剂盒及应用。 

背景技术

猪瘟（Classical swine fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的一种高发病率和高死亡率的烈性传染病，感染过程可分为急性、亚急性、慢性、迟发性等多种。CSF急性病例多见于流行初期，主要表现为突然发病，皮肤、粘膜发绀，全身痉挛；初便秘，后腹泻。后期出现步态不稳，随后麻痹，倒地死亡。毒力较低的CSFV毒株可引起亚急性CSF或温和性CSF，症状比较轻。妊娠母猪感染后出现“带毒母猪综合征”，发生流产、死胎、弱胎、木乃伊胎，新生仔猪死亡，耐过的猪终身带毒。猪瘟在世界范围内流行，是动物卫生组织要求申报的动物传染病之一。 

该病1833年首次出现于美国的俄亥俄洲，现在遍布全世界。发达国家通常采取扑杀政策防止和消灭猪瘟，澳大利亚、加拿大、爱尔兰、新西兰、瑞士和美国等国家都陆续宣布消灭了猪瘟，但近年来欧洲一些已消灭猪瘟的国家又出现有猪瘟的报道。在我国，猪瘟流行呈现典型和非典型共存、持续感染与隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等现象。我国自50年代中期以来，一直使用CSF兔化弱毒疫苗免疫控制CSF的大规模爆发流行。但是近半个世纪以来，CSF在我国仍屡禁不止，对畜产品造成的损失是无可估量的。 

CSFV为黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员，是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组大小约1.23×10⁴kb，仅含有一个大的开放读码框架（ORF）。整个ORF编码一个由3898个氨基酸残基组成的多聚蛋白，此多聚蛋白经病毒N^pro蛋白和细胞的蛋白酶裂解，形成4个结构蛋白（C、E0、E1、E2）以及至少7个非结构蛋白（N^pro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）。结构蛋白组装成熟的病毒粒子与病毒的感染和诱导机体的免疫应答反应有密切关系，而非结构蛋白则对病毒基因组复制、病毒粒子的组装成熟起调控作用。 

目前常用于检测猪瘟病毒的方法包括病原的分离鉴定、血清学方法和 RT-PCR、荧光定量PCR。病原的分离鉴定是最传统的检测方法，其结果准确可靠，但其影响因素多，实际操作起来相当费时费力，因此在临床应用中有一定的局限性；血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验和酶联免疫吸附试验等血清学试验的敏感性及特异性较低，操作也比较复杂；而RT-PCR、荧光定量PCR技术需要特殊的仪器设备（如PCR仪和凝胶成像系统等）和专业人员进行相关的操作，对于在基层和现场检测有局限性。因此建立一种快速，敏感，特异的检测猪瘟病毒的方法是十分必要的。