[发明专利]用于预测早期非转移性结直肠癌预后的微RNA生物标记物及检测方法

权利要求书

1.用于预测早期非转移性结直肠癌预后的一或多种哺乳动物靶细胞的分子标记诊断试剂盒，所述试剂盒包含多种核酸分子，每种核酸分子均编码微RNA序列，

其中所述多种分子的一或多种在所述靶细胞和一或多种对照细胞中差异表达，及

其中所述一或多种差异表达的核酸分子一起代表核酸表达特征，所述核酸表达特征是存在用于预测早期非转移性结直肠癌预后的微RNA生物标记物及检测方法的指征。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述早期非转移性结直肠癌表示Dukes’A和Dukes’B腺癌。

3.根据权利要求1-2所述的试剂盒，其中所述核酸表达特征包含至少一种编码微RNA序列的核酸分子，其表达在一或多种靶细胞中与在一或多种对照细胞中相比被上调；及包含至少一种编码微RNA序列的核酸分子，其表达在一或多种靶细胞中与在一或多种对照细胞中相比被下调。

4.根据权利要求1-3所述的试剂盒，其中所述核酸表达特征，即存在预测不同预后早期非转移性大肠癌的指征，包含至少三种核酸分子，优选至少六种核酸分子。

5.根据权利要求1-4任一项的试剂盒，其中所述核酸表达特征包含编码hsa-miR-27b(SEQ ID NO:1),hsa-miR-650(SEQ ID NO:2),hsa-miR-1291(SEQ ID NO:3)，hsa-let-7a(SEQ ID NO:4),hsa-miR-125a-5p(SEQ ID NO:5)和hsa-miR-224(SEQ ID NO:6)的核酸分子。

6.根据权利要求1-4任一项的试剂盒，其中所述核酸表达特征包括编码组合hsa-miR-27b(SEQ ID NO:1),hsa-miR-650(SEQ ID NO:2),和hsa-let-7a(SEQ ID NO:4)，组合公式Logit(p)=-1.1277-0.9133×(hsa-miR-27b)-0.3483×hsa-miR-650)+0.6629×(hsa-let-7a)。

7.用于预测早期非转移性结直肠癌预后的一或多种哺乳动物靶细胞的方法，所述方法包括：

(a)采集病人的的活检或手术切除组织；

(b)切片、制片；

(c)在切片上杂交至少一个编码微RNA序列的核酸分子；

(d)在显微镜下对微RNA的表达进行半定量，或用数字化图像进行定量分析；

(e)确定一或多种靶细胞中多种核酸分子的表达水平，每种核酸分子均编码一种微RNA序列；

(f)确定一或多种对照细胞中所述多种核酸分子的表达水平；

(g)通过对比在步骤(e)和(f)中获得的各自的表达水平，从所述多种核酸分子中鉴定出在靶细胞和对照细胞中差异表达的一或多种核酸分子，用于预测早期非转移性结直肠癌预后。

8.根据权利要求1-6任一项的试剂盒，其特征在于，为了标准化包含在所述核酸表达特征中的编码微RNA序列的核酸分子的所获得的表达水平，使用miRNA hsa-miR-423-5p(SEQ ID NO:7)，其在结肠直肠组织中稳定表达；为了对核酸分子标记物编码的微RNA序列进行表达量的阴性对照，应用hsa-miR-122(SEQ ID NO:8)，其在结直肠组织中无表达。

9.在一或多种哺乳动物靶细胞中预防或治疗表现为腺癌的结肠直肠癌的方法，所述方法包括：

(a)通过使用权利要求7或8的方法在一或多种靶细胞中鉴别核酸表达特征；及

(b)修饰所述一或多种细胞中包含在核酸表达特征中的编码微RNA序列的一或多种核酸分子的表达，由此其表达在所述一或多种靶细胞中被上调的核酸分子的表达被下调，且其表达在所述一或多种靶细胞中被下调的核酸分子的表达被上调。

10.预防和/或治疗一或多种靶细胞中表现为腺癌的结肠直肠癌的药物组合物，所述组合物包含一或多种核酸分子，每种核酸分子均编码与如权利要求1-9任一项所定义的其表达在所述一或多种靶细胞中被上调的核酸分子编码的微RNA序列至少部分互补的序列，和/或相应于如权利要求1-9任一项所定义的其表达在所述一或多种靶细胞中被下调的核酸分子编码的微RNA序列的序列。

11.权利要求10的药物组合物在制备预防和/或治疗表现为腺癌的结肠直肠癌的药物中的应用。