[发明专利]13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种加拿大红豆杉植物中提取有效化合物的方法，特别是13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III的提取分离方法。

背景技术

红豆杉中提取的紫杉醇具有防癌治癌的作用，而且无明显的不良反应，是国际上公认的植物提纯的抗癌药物，临床应用对多种癌症有较好的效果。美国的临床研究证明对卵巢和乳腺癌有突出的疗效。此外，对高血压、糖尿病、冠心病也有一定效果。红豆杉中含有的紫杉醇，具有独特的抗癌机制和较高的抗癌活性，能阻止癌细胞的繁殖、抑制肿瘤细胞的迁移，被公认是当今天然药物领域中最重要的抗癌活性物质。

目前我国共有四个种和一个变种的红豆杉，即云南红豆杉、西藏红豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉和南方红豆杉（变种）天然红豆杉树的紫杉醇主要分布于树皮中，整株利用率低。而加拿大红豆杉资源丰富，紫杉烷类化合物的含量较高，枝叶中 13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III（ 9-DHB）含量可达5-8?。该化合物与紫杉醇具有相同的母环结构，在半合成紫杉醇和多西紫杉醇领域有很好的利用价值。红豆杉枝叶的传统提取工艺是直接采用乙醇浸提，浓缩得到浸膏，浸膏经过3次以上的硅胶柱层析，才能够产出含量达到40%的紫杉烷类化合物，而且分离得到的浓缩物中含有大量的色素和油性物质，严重影响重结晶的效果和收率，传统紫杉烷化合物处理工艺路线繁琐，一次收率只能达到30%，收率较低；

13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III为白色粉末状物质，简称9-DHB ，英文名称: 13-Acetyl-9-dihydrobaccatin III，CAS号: 142203-65-4，分子式: C₃₃H₄₂O₁₂分子量: 630.67938；结构式如式I：

目前半合成紫杉醇和多西 紫杉醇的主要原料是10-DAB，随着市场需求的增加，10-DAB的价格也不断上涨，给合成紫杉醇的生产厂家带来了巨大的资金压力。9-DHB的有效提取和纯化，可以增加合成紫杉醇的原料，大大缓解原料紧张的局面，提高红豆杉原料的利用率。

发明内容

本发明目的在于提供一种13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III的提取分离方法，该方法以加拿大红豆杉枝叶为原料，晾干粉碎后，按每1公斤红豆杉枝叶粉末添加4-7L甲醇-水溶液的比例，在红豆杉枝叶粉末加入甲醇-水溶液浸泡8-24h、过滤，滤渣再次用3-4L甲醇-水溶液浸泡，重复2-3次，合并滤液，滤液经浓缩回收甲醇后加入盐酸溶液调节滤液PH值为5-6，然后加入氯仿萃取3-4次，收集合并氯仿层，浓缩得到氯仿浸膏，氯仿浸膏溶解后采用R型树脂柱吸附，富集13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III，用丙酮-水、甲醇-水、乙醇-水中的一种作为洗脱液，洗脱液加压，按照每小时2个柱体积的流速进行洗脱，收集13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III段洗脱液，浓缩，结晶，干燥即得到13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III，其中加压压力小于3公斤。

本发明中所述浸泡时使用的甲醇-水溶液是质量百分比浓度为40-90%的甲醇水溶液。

本发明中所述R型树脂为Chroma-R204。

本发明中所述在用R型树脂柱吸附前，氯仿浸膏先采用酸性氧化铝柱层析，具体操作为氯仿浸膏用质量百分比浓度为60-80%甲醇溶液溶解，离心去除沉淀，其中添加的甲醇溶液质量为浸膏质量的10-15倍，然后离心后溶液以每小时2倍柱体积的流速，过酸性氧化铝柱，收集流出液、浓缩得到浸膏，浸膏溶解后再采用R型树脂柱吸附、洗脱。

所述酸性氧化铝是100-250目的中性氧化铝用质量百分比浓度为30-50%的冰醋酸溶液浸泡2-3h后200-300℃烘干制得。

本发明方法的优点和技术效果：该工艺在传统的药物提取工艺的基础上选用酸水萃取处理，可以去除大量的色素和杂质，有效降低出膏量，减少了后续纯化处理的难度，然后采用R型树脂分离，一次层析就可以产出含量达到40%以上的13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III，分离效果显著，在通过简单的重结晶就可以得到含量99%以上的产品，同时可以将9-DHB、紫杉醇、10-DAB等活性紫衫烷类化合物有效分离开来，且本方法工艺简单，回收率高，适合工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容，本发明方法中如无特殊说明，均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均采用常规方法配制的试剂或市售常规试剂。