[发明专利]一种生物质材料油脂的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种生物质材料油脂的提取方法及其应用，其特征在于包含如下步骤：将生物质材料加入到甲醇和DMSO的混合溶剂中水浴加热破壁，离心收集上层油相；往离心的沉淀中加入亲脂性的有机溶剂水浴加热萃取油脂，离心收集上层油相。

2.根据权利要求1所述的生物质材料油脂的提取方法，其特征在于：所述的生物质材料包括产油单细胞生物、产油动植物细胞、组织和器官。

3.根据权利要求1所述的生物质材料油脂的提取方法，其特征在于：

所述的甲醇和DMSO的混合溶剂中甲醇与DMSO的体积比为5～10:1；

所述的亲脂性的有机溶剂为正己烷与乙醚按体积比0.5～2:1组成的混合溶剂；

所述的水浴加热破壁的条件为45～60℃水浴加热搅拌10～40分钟；

所述的水浴加热萃取油脂的条件为45～60℃水浴加热10～40分钟。

4.权利要求1-3任一项所述的生物质材料油脂的提取方法在生物质材料总脂含量和脂肪酸组成分析中的应用。

5.一种生物质材料总脂含量的分析方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）对待测定生物质材料进行冷冻干燥处理；准确称取一定量生物质材料；

（2）加甲醇和DMSO的混合溶剂水浴加热破壁，离心，收集上层油相；

（3）收集离心的沉淀，加入亲脂性的有机溶剂水浴加热萃取油脂，离心收集上层油相；

（4）合并上述收集的油相，水洗，离心，收集上层油相；

（5）下层水相用有机溶剂萃取，离心，收集上层油相；

（6）合并油相并进行浓缩处理，获得总脂，计算总脂含量。

6.根据权利要求5所述的生物质材料总脂含量的分析方法，其特征在于：

步骤（5）中所述的有机溶剂为正己烷或石油醚；

步骤（6）中所述的浓缩处理的方法为用氮气吹干、真空离心干燥或其它小体积浓缩方法，并冷冻干燥除去油脂中的痕量水。

7.根据权利要求5所述的生物质材料总脂含量的分析方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）对待测定生物质材料进行冷冻干燥处理；准确称取冷冻干燥后的生物质材料100～200mg；

（2）加2～10mL甲醇与DMSO以体积比5～10:1组成的混合溶剂45～60℃水浴加热10～40分钟破壁，离心，收集上层油相；

（3）重复步骤（2），将离心的沉淀用甲醇与DMSO的混合溶剂水浴加热破壁1～5次，收集上层油相；

（4）收集离心的沉淀，加入2～10mL正己烷与乙醚以体积比0.5～2:1组成的混合溶剂45～60℃水浴加热10～40分钟萃取油脂，离心收集上层油相；

（5）重复步骤（4），将离心的沉淀用正己烷与乙醚的混合溶剂水浴加热萃取油脂1～5次，收集上层油相；

（6）合并上述收集的油相，水洗，离心，收集上层油相；

（7）下层水相用正己烷或石油醚萃取，离心，收集上层油相；

（8）重复步骤（7）1～3次，收集上层油相；

（9）合并油相，用氮气吹干、真空离心干燥或其它小体积浓缩方法进行油脂浓缩处理，再用冷冻干燥的方法除去油脂中的痕量水，获得总脂，计算总脂含量。

8.一种生物质材料总脂脂肪酸组成的分析方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）使用权利要求5-7任一项所述的方法获得总脂后，用有机溶剂配制一定浓度的总脂溶液；

（2）将总脂溶液用氮气吹干后进行甲酯化，萃取甲酯化生成的脂肪酸甲酯；

（3）气相检测分析脂肪酸甲酯组成及含量。

9.根据权利要求8所述的生物质材料总脂脂肪酸组成的分析方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的有机溶剂为正己烷或石油醚，所述的总脂溶液的浓度为10～30mg/mL；

步骤（2）为：取50～100μL浓度为10～30mg/mL总脂溶液，氮气吹干后，加0.5～2mL浓度为0.1～1mol/mL的KOH-甲醇溶液，40～70℃水浴反应10～40min；待冷却到室温，加0.5～2mL浓度为14%的BF₃-甲醇溶液，45～65℃水浴反应5～20min；待冷却到室温，加0.5～2mL饱和食盐水和0.5～2mL正己烷或石油醚萃取脂肪酸甲酯。

10.根据权利要求8所述的生物质材料总脂脂肪酸组成的分析方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的气相检测的方法为：色谱柱：毛细管柱HP-88或类似固定相的毛细管气相色谱柱；载气：高纯度N₂；柱流速：1.5mL/min；尾吹流速：25mL/min；H₂流速：30mL/min；空气流速：400mL/min；分流比：20:1；汽化室温度：240℃；，检测器温度：240℃；色谱柱梯度升温：初始温度为100℃，保持5min，以4℃/min升至240℃，保持10min。