[发明专利]防治土传病害的微生物土壤改良剂

权利要求书

1.防治土传病害的微生物土壤改良剂，其特征在于：采用胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)CICC No.21699、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872、产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No.22023和黄直丝链霉菌(Streptomyces flavoretus)ACCC No.40046制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：胶冻样芽孢杆菌5～25%，枯草芽孢杆菌15～50%，沼泽红假单胞菌5～30%，产朊假丝酵母10～40%，黄直丝链霉菌10～35%。

2.根据权利要求1所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：

1）接种：配制各菌种的固体培养基，灭菌后严格进行无菌操作，从斜面转接至平板，温度28℃下培养3天；

2）一级培养：将长好的平板挑取单菌落转接至装有液体培养基的50mL锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养24～48h；

3）二级发酵：将一级培养菌种接种于盛有液体培养基的500mL锥形瓶中，无菌操作，30℃、130r/min培养36～72h；

4）将各菌种按所述菌种的质量百分比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基：葡萄糖50～100g/L、蔗糖20～100g/L、乳酪蛋白胨1～5g/L、蛋白胨1～5g/L、琼脂1～5g/L、KH₂PO₄1～5g/L、尿素1～5g/L、K₂HPO₄5～20g/L、MgSO₄·7H₂O5～20g/L、NaCl5～20g/L、(NH₄)₂SO₄5～20g/L，其余为蒸馏水；pH6.0～8.0，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到10～15×10⁸个/mL，即得到所述防治土传病害的微生物土壤改良剂。

3.根据权利要求2所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：所述胶冻样芽孢杆菌采用的液体培养基为：蔗糖10.0g，CaSO₄·2H₂O0.1g，K₂HPO₄0.2g，CaCO₃5.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L。

4.根据权利要求2所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌采用的液体培养基为：牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl3g、pH7.0，蒸馏水定容至1.0L。

5.根据权利要求2所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：所述沼泽红假单胞菌采用的液体培养基为：NH4Cl1.5g，KH₂PO₄1.5g，MgSO₄·7H₂O0.8g，NaCl4.0g，NaHCO₃1.8g，CaCl₂0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0g，CH₃COONa4.0g，微量元素1.0mL/L包括（FeCl₃·6H₂O5.0g，ZnSO₄·7H₂O1.0g，CuSO₄·5H₂O0.05g，CoCl₃·6H₂O0.5g，硼酸1.0g，MnCl₃·4H₂O0.5g），添加CH₃COOCH₃调节pH，蒸馏水定容至1.0L。

6.根据权利要求2所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：所述产朊假丝酵母采用的液体培养基为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，琼脂15g，高压灭菌30分钟。

7.根据权利要求2所述的防治土传病害的微生物土壤改良剂的制备方法，其特征在于：所述黄直丝链霉菌采用的液体培养基为：蔗糖10.0g，CaSO₄·2H₂O0.1g，K₂HPO₄0.2g，CaCO₃5.0g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.2g，蒸馏水定容至1.0L。