[发明专利]平邑甜茶无融合生殖MhSERK1基因植物表达载体构建方法与应用有效
| 申请号： | 201310641283.3 | 申请日： | 2013-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN103849646A | 公开（公告）日： | 2014-06-11 |
| 发明（设计）人： | 张丽杰;董文轩;王玉霞;孙晓梅;祁庆钦 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66 |
| 代理公司： | 沈阳科威专利代理有限责任公司 21101 | 代理人： | 张述学 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 平邑 甜茶无 融合 生殖 mhserk1 基因 植物 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
1.苹果属平邑甜茶无融合生殖相关MhSERK1基因植物表达载体，其特征在于是由平邑甜茶无融合生殖相关MhSERK1基因与植物表达载体pBI121构成。
2.根据权利要求1所述的苹果属平邑甜茶无融合生殖相关MhSERK1基因的植物表达载体，其特征在于所述的植物表达载体为XbaI和SmaI双酶切MhSERK1后插入到表达载体pBI121质粒进行重组反应得到。
3.如权利要求2所述的平邑甜茶无融合生殖相关MhSERK1基因植物表达载体的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）平邑甜茶无融合生殖MhSERK1基因的克隆
提取平邑甜茶发育时期的子房总RNA，然后反转录获得cDNA第一链；设计引物扩增MhSERK1基因：
上游引物S1：5’-GGATGGAGAGAAAGGTTGGGAAT-3’
下游引物S2：5’-ACTTACCTTGGACCGGATAACT-3’
以反转录获得的cDNA为模板，进行聚合酶链式PCR扩增反应，产物连接到PGM-T载体，转化TOP10感受态细胞，进行序列测定；
2）植物表达载体pBI121-MhSERK1的构建
设计引物以平邑甜茶子房cDNA为模板，用高保真酶进行PCR反应，在MhSERK1的上下游分别引入酶切位点XbaI和SmaI序列：
上游引物MhSERK1-XbaI：5’-GGTCTAGAATGGAGAGAAAGGTTGGGAAT-3’
下游引物MhSERK1-SmaI：5’-ACCCCGGGTTACCTTGGACCGGATAACTC-3’
PCR产物连接到PGM-T载体得到重组质粒PGM-T-MhSERK1，转化TOP10感受态细胞；提取质粒PGM-T-MhSERK1和pBI121，并用XbaI和SmaI双酶切后连接，转化，筛选并测序验证，植物表达载体pBI121-MhSERK1构建成功。
4.如权利要求1所述的苹果属平邑甜茶无融合生殖相关MhSERK1基因植物表达载体，其特征是在植物无融合生殖发育特性中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于沈阳农业大学，未经沈阳农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310641283.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
