[发明专利]提高HepGL肝癌细胞氨基甲酰磷酸合成酶表达的方法

权利要求书

1.一种提高HepGL肝癌细胞氨基甲酰磷酸合成酶表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取HepGL肝癌细胞CPS1基因组DNA序列，并将所述DNA进行重亚硫酸盐处理；

以所述处理后的DNA为模板，扩增CPS1的启动子区域序列；

以所述启动子区域序列为模板，进行甲基化特异性基因扩增；

将扩增出的甲基化序列进行测序，并与正常肝细胞的CPS1的启动子区域序列进行比对；

根据所述甲基化序列中甲基化位点周围的碱基序列构建TALENs表达质粒及与所述甲基化位点同源的非甲基化同源质粒，其中，所述同源质粒中同源非甲基化序列为CG突变为CA的突变序列；

将所述TALENs表达质粒与同源质粒分别导入感受态大肠杆菌，并进行单克隆培养以获取较多的TALENs表达质粒和同源质粒；

将所述TALENs表达质粒和同源质粒转染至HepGL肝癌细胞中；

筛选发生转染的HepGL肝癌细胞；

设等量的2组HepGL肝癌细胞进行Q-PCR和蛋白质印迹法处理，以比较各组细胞中CPS1的mRNA及蛋白的表达差异，具体为设置实验组和阴性对照组2组处理，其中，实验组为转染后的HepGL肝癌细胞，阴性对照组为加入PBS的HepGL肝癌细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，扩增所述CPS1的启动子区域的引物序列为5’-GGAAATTTAAAG-3’，5’-ACCACTTTAAAAACTATCAAAATC-3’。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以所述启动子区域序列为模板，进行甲基化特异性基因扩增的引物包括针对甲基化DNA的引物和针对非甲基化DNA的引物；

所述针对甲基化DNA的引物序列为5’-ATGGAAATTTAAAGATCGTTGTGTA-3’，5’-TCAAAATCCTCGTCATTTTAATAAT-3’；

所述针对非甲基化DNA的引物序列为5’-GAATGGAAATTTA-AAGATTTGTT-3’，5’-AAATCCTCATCATTTTAATAAT-3’。

4.权利要求1所述的方法在生物人工肝种子细胞中用于提高CPS1表达的应用。