[发明专利]分泌表达花生过敏原的乳酸乳球菌工程菌的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种能分泌表达花生过敏原nArah2的重组乳酸乳球菌菌株，其特征在于，所述菌株为Lactococcus lactis NZSE，于2013年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.8217。

2.包含权利要求1所述的重组乳酸乳球菌菌株的疫苗，其特征在于，所述疫苗为口服制剂。

3.根据权利要求2所述的包含重组乳酸乳球菌菌株的疫苗，其特征在于，所述口服制剂为胶囊剂、锭剂、粉剂或颗粒剂。

4.权利要求1所述的重组乳酸乳球菌菌株在制备可用于治疗花生过敏的乳酸乳球菌疫苗中的用途。

5.一种制备权利要求1所述的重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

a)对花生过敏原Arah2的天然基因序列进行密码子优化以得到优化基因nArah2，如SEQNo.2所示；

b)利用优化基因nArah2进一步构建分泌表达载体质粒PNZ2；

c)利用重组表达质粒转化乳酸乳球菌并筛选鉴定获取重组乳酸乳球菌菌株。

6.根据权利要求5所述的制备重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于步骤b）中构建重组表达质粒PNZ2时包括以质粒pUC57-nArah2为模板，利用引物Pra2F：5'-CTCGAGCTCCGTCAACAATGGGAATTACAAG-3'和Pra1R：5'-CGGGGTACC TTAATAACGATCACGACCAC-3'对nArah2基因进行PCR扩增，同时以Lactococcus lactis subsp.cremoris MG1363的基因组DNA为模板，利用引物Psp1F：5'-CCGGCCATGGTGAAAAAAAAGATTATCTCAG-3和Psp1R：5'-CTCGAGCTCAGCGTAAACACCTGACAAC-3'PCR扩增Usp45蛋白的信号肽序列-SP_Usp45的步骤。

7.根据权利要求6所述的制备重组乳酸乳球菌菌株的方法，其特征在于步骤c）中的转化方法是电转化。