[发明专利]小麦-滨麦3D（3Ns）异代换系的培育方法和鉴定方法

权利要求书

1.小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的培育方法，其特征在于包括下述步骤：1)四倍体硬粒小麦与八倍体小滨麦杂交，在各世代均进行鉴定，筛选出染色体数目为2n＝42，且含有滨麦Ns基因组染色体的单株；2)筛选出的单株均套袋自交，在F5世代，选育出含有2条滨麦Ns染色体的小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系。

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于所述四倍体硬粒小麦品种为D4286，八倍体小滨麦品种为M842-16。

3.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于所得小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的染色体构型为2n＝42＝21II，染色体组成为由40条小麦染色体和2条滨麦Ns染色体构成，滨麦的2条Ns染色体配对为1个二价体染色体。

4.小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于采用细胞遗传学分析方法：将F5后代小滨麦3D(3Ns)异代换系种子室内发芽，剪取根尖于冰水预处理24h，卡诺固定液固定，1％纤维素酶+1％果胶酶酶解，醋酸洋红染色压片；花粉母细胞观察：田间取适龄幼穗，用卡诺固定液固定，醋酸洋红染色压片，显微镜观察。

5.小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于采用基因组原位杂交(GISH)方法：采用CTAB法提取滨麦和华山新麦草全基因组DNA并进行标记，染色体制片及原位杂交，每张制片加40μl杂交液，然后95℃变性8min，杂交在原位杂交仪上依照程序进行。

6.小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于采用重复序列(pAs1)荧光原位杂交(FISH)方法：采用缺刻平移法对重复序列pAs1进行标记，然后进行荧光原位杂交(FISH)，每张制片加40μl杂交液，然后95℃变性8min，杂交在原位杂交仪上依照程序进行。

7.根据权利要求5或6所述的小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于所述杂交液组成为：20×SSC4μl，ssDNA(鲑鱼精DNA，5ug/uL)1μl，10％(W/V)SDS1μl，50％(W/V)DS8μl，去离子甲酰胺20μl，探针DNA或pAs1探针DNA100ng，无菌去离子水加至40μl。

8.根据权利要求5或6所述的小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于所用原位杂交仪为HYBrite原位杂交仪，程序设置为75℃8min，37℃16h。

9.小麦-滨麦3D(3Ns)异代换系的鉴定方法，其特征在于采用SSR和EST-STS标记分析方法：采用小麦D基因组1D～7D染色体的14对SSR引物，对F5后代小滨麦3D(3Ns)异代换系及其亲本进行分析，确定D基因组染色体的组成；采用小麦1-7同源群染色体的14对EST-STS引物，确定Ns基因组染色体的同源群归属；采用PCR扩增反应对DNA进行扩增，扩增产物经8％非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，点样量8μl，150V恒压条件下电泳4～5h，硝酸银染色。

10.根据权利要求11所述的鉴定方法，其特征在于所述PCR扩增反应的反应体系为包含1×buffer(100mM Tris-HCl pH8.3，1.5mM MgCl₂)，0.2M dNTPs，50ng引物，1U Taq DNA聚合酶，50～100ng模板DNA，反应条件为94℃预变性3min，34个循环按照94℃变性1min，50，55或60℃退火1min，72℃延伸2min进行，最后充分延伸10min。