[发明专利]ADM-bFGF复合体及运用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学工程中动物皮肤组织脱细胞技术领域，具体来说是一种脱细胞真皮基质-碱性纤维母细胞生长因子复合体（ADM-bFGF复合体）及运用。

背景技术

随着世界各国社会经济的发展，居民生活水平的提高，由饮食结构的改变、日趋紧张的生活节奏以及少动多坐的生活式等诸多因素，全球糖尿病发病率及患病率增长迅速，糖尿病已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康慢性疾病。糖尿病患者皮肤易受损伤，损伤后往往反复发作，迁延不愈，形成顽固难愈性溃疡。但是由于对于糖尿病所致创面难愈的机制尚不清楚，因此常规治疗往往不能达到预期效果。近年来，随着对创面愈合过程中生长因子变化的深入研究，有作者认为糖尿病创面生长因子及其受体绝对或相对减少是糖尿病并发创面难愈的重要原因 。因此，如何促进糖尿病创面的愈合成为临床急需解决的重要课题之一。

皮肤创口愈合是一个复杂的生物学过程，通常是由成纤维细胞增殖分化、新生血管的形成、细胞外基质纤维化和表皮细胞增生覆盖创面等综合作用的结果。生长因子是一系列具有多种功能的活性肽类物质，它们促进或抑制着细胞的增殖与分化，同时也是介导细胞与细胞间相互作用的重要物质。在整个创面愈合过程中，它们影响细胞的迁移、增殖和分化，调控着细胞的生长速度，引导和调整创伤愈合的反应。

研究认为纤维母细胞生长因子（FGF，fibroblast growth factor）调控着创面愈合的各个阶段，对应用于治疗慢性难愈性创面和大面积烧伤创面有着广阔的前景。在皮肤创伤早期，FGF家族的酸性纤维母细胞生长因子（acid fibroblast growth factor ，aFGF）、碱性纤维母细胞生长因子（base fibroblast growth factor bFGF）、FGF7和FGF10等表达均明显上调，提示它们可能参与了皮肤创伤愈合过程。 FGF与FGF结合蛋白（FGF binding protein，FGF-BP）结合在皮肤修复过程中起重要作用，皮肤损伤后FGF-BP表达增加，尤其是伤口部位的角质化细胞，FGF-BP能够与FGF7、FGF10和FGF22相互作用，增强低浓度FGF7、FGF10和FGF22的活性。

bFGF属于FGF家族，是由154个氨基酸组成的阴离子多肽类生长因子，包括9个FGF配基，具有3个外显子和2个内含子，其定位于第四号染色体。bFGF由于翻译位点的不同（分别为AUG和CUG），使不同来源的bFGF结构上存在一定差异，形成了18000、22000、24000、26000四种同工异构体，18000的bFGF是主要的活性形式，位于胞浆，24000、26000的bFGF位于细胞核。bFGF广泛地分布于中胚层和神经外胚层的多种组织和器官，包括血管基底膜和细胞间基质。林绍华等通过研究20例正常成人皮肤组织，结果表明正常成人皮肤组织均表达bFGF，并且发现阳性细胞主要分布于基底层及其上方少量棘细胞，呈中阳性强度表达。此外，真皮少量内皮细胞、部分成纤维细胞和胞外基质也有阳性表达。微循环障碍是糖尿病微血管病变的典型改变之一，内皮细胞结构和功能的完整是稳定微循环的关键。在机体发生创伤后，创伤部位的新生血管给创伤部位提供氧、营养物质和生物活性蛋白，局部组织的缺血可直接影响创伤愈合的程度及其预后。它与血管内皮细胞因子（VEGF）、bFGF、血管形成因子-1（Ang-1）等细胞因子密切相关。bFGF作为重要的促有丝分裂原，能直接作用于血管内皮细胞和血管平滑肌细胞，加速细胞增殖和迁移，促进新毛细血管形成。另外，bFGF还能通过促进VEGF 基因表达，诱导新生血管形成。

发明内容

本发明的目的是提供一种脱细胞真皮基质-碱性母细胞生长因子复合体（ADM-bFGF复合体），该ADM-bFGF复合体在糖尿病创面早期愈合时，具有加快创面愈合的作用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种ADM-bFGF复合体，该ADM-bFGF复合体经过以下步骤获得：

（1）将动物皮肤组织在SDS浓度为0.0087M/L～1.0000M/L、NaOH浓度0.01M/L～1.00M/L的溶液在25℃～42℃温度条件下处理12～72小时得到脱细胞真皮基质（ADM）；

（2）将bFGF DNA置于脂质体包裹后，再和步骤（1）中脱细胞真皮基质（ADM）放一起，通过静电吸附，使bFGF DNA附着在脱细胞真皮基质（ADM）上，形成ADM-bFGF复合体。