[发明专利]一种肝癌肿瘤标志物、其抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤标志物技术领域，尤其涉及一种肝癌肿瘤标志物、其抗体及应用。

背景技术

肝癌是常见的恶性肿瘤之一，分为原发性肝癌和转移性肝癌，其中原发性肝癌最为常见且恶化程度较高。世界每年都约有60万人新患肝癌，在众多恶性肿瘤中排第五位。其中，肝癌在我国病人数占全球肝癌发病人数的55%，这已经严重威胁了我国人民的健康和生命安全，其危险性不容小觑。因此，急需发现一种有效而又具有特异性的肿瘤标志物以帮助肝癌的早期诊断或者后期治疗。

由于肝癌化疗放疗的不敏感型，使肝癌的治疗仍然缺乏有效的治疗。因此，寻找一种切实可行性的治疗靶点或新方法成为治疗肝癌的当务之急。研究发现，糖扼合物（Glpcokonjugaten）是细胞膜甚至是蛋白上存在的一类非常重要的生物小分子，他们对于信号传导以及维持正常的生理机能都起着非常关键的作用。而在肿瘤中，这些分子的结构往往发生异常，成为糖抗原。这些糖抗原会表达在异常的肿瘤细胞表面或者是异常的糖蛋白表面，并且与肿瘤的发生和发展存在密切的关系。异常肿瘤的糖抗原目前发现的有T、Tn、β1，6分支的N-glycan抗原，以及如Lewis a，Lewis b等鞘糖脂。

本领域还需要寻找更多的肝癌肿瘤标志物，及制备相应的抗体，以用于肝癌的快速、准确的诊断。

发明内容

本发明人通过研究发现含Fucα1，2结构的糖抗原在肝癌组织中有特异性高表达现象，而在癌旁的正常组织中没有这种高表达现象，本发明基于此发现完成。

本发明提供一种肝癌肿瘤标志物、其抗体及应用，所提供的肝癌肿瘤标志物能够明确表征肝癌的发生，所提供的其抗体能够用于制备诊断肝癌的试剂盒。

本发明包括以下内容：

在第一方面，本发明提供一种肝癌肿瘤标志物，其为含Fucα1，2结构的糖抗原，所述Fucα1，2结构即α1→2岩藻糖苷键。

本发明中，含Fucα1，2结构的糖抗原在下文中有时称为含Fucα1，2结构的糖链，其含义是相同的，在本发明中可以替换。

作为本发明的优选，所述含Fucα1，2结构的糖抗原来源于鞘糖脂，即所述含Fucα1，2结构的糖抗原是鞘糖脂的一部分。

作为本发明的优选，所述含Fucα1，2结构的糖抗原来源于N-糖苷键型糖蛋白，即所述含Fucα1，2结构的糖抗原是N-糖苷键型糖蛋白的一部分。

在第二方面，本发明提供一种多克隆抗体，是通过含Fucα1，2结构的糖抗原免疫动物产生的。

作为本发明的优选，所述动物为小鼠。

在第三方面，本发明提供一种单克隆抗体，是含Fucα1，2结构的糖抗原免疫小鼠得到的脾细胞与小鼠淋巴瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞产生的。

作为本发明的优选，所述小鼠淋巴瘤细胞为P2-X63-Ag8.653。

在第四方面，本发明提供一种肝癌诊断试剂盒，包括第二方面所述的多克隆抗体或者第三方面所述的单克隆抗体。

在第五方面，本发明提供第二方面所述的多克隆抗体或者第三方面所述的单克隆抗体在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。

在第六方面，本发明提供第二方面所述的多克隆抗体或者第三方面所述的单克隆抗体在组织免疫染色中的应用。

本发明的有益效果为：本发明通过研究发现含Fucα1，2结构的糖抗原在肝癌组织中有特异性高表达现象，而在癌旁的正常组织中没有这种高表达现象，基于此判断含Fucα1，2结构的糖抗原可以作为肝癌诊断的肿瘤标记物。本发明以含Fucα1，2结构的糖抗原为免疫原制备得到了其多克隆抗体和单克隆抗体，用于肝癌的诊断，有助于快速、准确地发现肝癌。

附图说明

图1为含Fucα1，2结构的糖链的二级质谱图，以C24和C16的Fucα1，2结构的糖链为例，其中C24和C16指神经酰胺部分的脂肪酸链的长度。

图2为含Fucα1，2结构的糖链的三级质谱图，以C26和C16的Fucα1，2结构的糖链为例，其中C26和C16指神经酰胺部分的脂肪酸链的长度。

图3为含Fucα1，2结构的糖链的四级质谱图，以C26和C16的Fucα1，2结构的糖链为例，其中C26和C16指神经酰胺部分的脂肪酸链的长度。

图4为肝癌组织和癌旁组织中含Fucα1，2结构的糖链含量对比结果，其中**表示p<0.001。