[发明专利]一种转Cry1Ab抗虫基因水稻品系mfb-MH86的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种转Cry1Ab抗虫基因水稻品系mfb-MH86的检测方法及其所依赖的转化体特异序列。

背景技术

水稻是我国乃至世界最主要的粮食作物之一。水稻也是虫害发生较为严重的作物之一。我国水稻田间害虫有600多种上，其中分布广泛且为害较为严重的是二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫。据统计，每年我国由虫害造成的损失占水稻总产量的5％以上，高达一千万吨，每年用于水稻害虫防治的费用都在135亿元人民币以上。而在水稻品种及野生稻中没有抗鳞翅目害虫的种质资源可以利用。以转基因技术为核心的品种设计技术则可以将远缘物种的抗性基因导入水稻中，从而使现有品种获得高抗虫特性。目前已经有多个转基因水稻品系获准进入环境释放和生产性试验。对转基因作物的有效监管是转基因作物安全利用的前提和保障。转基因作物外源序列插入片段旁侧序列是转基因植物品系的最重要的分子身份证。因此，外源插入片段的旁侧序列是建立转基因作物品系特异性检测方法的重要技术资料。

mfb-MH86是福建省农业科学院生物技术研究所和中国科学院遗传与发育生物学研究所共同研发的抗二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟以及大螟的具有广泛应用前景的转基因水稻品系。利用插入位点旁侧序列特异性地鉴定转基因品种（品系）是目前鉴定转基因作物最可靠最特异的检测方法，是准确鉴别区分同一转化体及其衍生品系的方法。

利用插入位点旁侧序列鉴定转基因品系，该方法已在鉴定克螟稻、Bt汕优63、科丰6号和科丰8号品系中建立。mfb-MH86是最新研发的抗虫转基因水稻品系，尚无任何相关转基因水稻mfb-MH86外源基因插入片段的旁侧序列文章报道和专利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种转Cry1Ab抗虫基因水稻品系mfb-MH86的检测方法，利用插入位点旁侧序列特异性地鉴定转基因品种（品系），根据转基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁侧序列特征提供了该转基因品系的特异性PCR检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

所述方法是转化体mfb-MH86中外源基因Cry1Ab表达框在水稻染色体上插入片段及其5’端旁侧特异序列SEQ ID NO:1和3’ 端旁侧特异序列SEQ ID NO:2，以及基于这2段序列建立的特异性PCR扩增鉴定技术。

所述的5’端旁侧特异序列为LB端旁侧序列，其序列如SEQ ID NO:1所示；所述的3’端旁侧特异序列为RB端旁侧序列，其序列如SEQ ID NO:2所示。

依据LB端旁侧序列设计的一对特异性引物为：

正向引物为B70-1F：5’-ATTGAAAGATGGGTGAAGGG-3’，

反向引物为Bb86-L3：5’-TCTTCATCTGAGCAAACATAAAC-3’。

所述的特异性引物：正向引物为依据SEQ ID NO:1中1-390位序列设计，反向引物依据SEQ ID NO:1中391-2000位序列设计。

依据RB端旁侧序列设计的一对特异性引物为：

正向引物为Bb86-R4：5’- TGTCTAACTACATCGTCTCTGCC-3’，

反向引物为B70-7R：5’-AAGACGAAGTTAGAAGACCA-3’。

所述的特异性引物：正向引物为依据SEQ ID NO:2中1-1300位序列设计，反向引物依据SEQ ID NO:2中1301-2000位序列设计。

一种转基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为载体LB旁侧序列及其插入水稻基因组中的一段序列，LB端旁侧序列如SEQ ID NO:1所示，其中水稻基因组序列为1-390bp，载体LB序列为391-2000bp，该特异性序列为转Cry1Ab基因水稻品系mfb-MH86所特有。

一种转基因水稻品系mfb-MH86外源基因插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为载体RB旁侧序列及其插入水稻基因组中的一段序列，RB端旁侧序列如SEQ ID NO:2所示，其中水稻基因组序列为1-1300bp，载体RB序列为1301-2000bp，该特异性序列为转Cry1Ab基因水稻品系mfb-MH86所特有。

PCR反应产物中含有SEQ ID NO:1序列或SEQ ID NO:2序列。