[发明专利]一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米的构建方法无效
| 申请号： | 201310651763.8 | 申请日： | 2013-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN103667340A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 邱法展;张祖新;杜邓襄;张小波;张方东;郑用琏 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 稳定 遗传 转基因 玉米 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米的构建方法，其步骤如下：
（1）按照常规方案制备胚性玉米愈伤组织；
（2）转基因载体的构建：
pCAMBIA3300载体用BamH I和Hind III进行双酶切消化并重新连接cry1C*基因获得目的载体；然后使用限制性内切酶samI切下载体上的潮霉素抗性基因，使用连接酶将带有samI酶接头的草丁膦抗性基因bar基因替换，获得转基因载体；
（3）利用基因枪介导转化的方法，将包裹有目的基因载体的金粉轰击高渗培养后的胚性愈伤组织；基因枪轰击后恢复培养7-10天后转入含有2mg/L双丙氨膦的筛选培养基筛选培养2-3轮，每轮20-30天；筛选后将具有除草剂抗性的愈伤组织转到分化培养基分化成苗，得到一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米单株；
所述的cry1C*基因序列为SEQ ID NO.1所示。
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