[发明专利]微阵列芯片检测中核苷酸序列的颗粒标记方法

权利要求书

1.一种在利用微阵列芯片检测靶标分子的方法中对靶标分子进行标记的方法，该方法涉及到微阵列芯片和靶标分子；微阵列芯片上连接有若干种探针；靶标分子是若干种靶标分子的混合物，每种靶标分子中含有能与芯片上的某种探针结合的序列、还含有待测靶标位点的序列，一种靶标分子对应一种探针；

该方法包括如下步骤：颗粒表面包被上若干个功能基团，记作功能化颗粒；每种靶标分子都标记有修饰基团，记作修饰化靶标分子；所述功能基团与所述修饰基团能够相互作用；利用功能化颗粒和发光基团使每种修饰化靶标分子都能发光，从而实现对靶标分子的标记。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述利用功能化颗粒和发光基团使每种修饰化靶标分子都能发光的方法为如下（1）-（5）中任一所述的方法：

（1）将修饰化靶标分子混合物中的一种修饰化靶标分子进行发光基团标记，记作修饰化且发光化靶标分子；将除修饰化且发光化靶标分子之外的其它修饰化靶标分子混合物、修饰化且发光化靶标分子、功能化颗粒共同孵育，通过功能基团与修饰基团的相互作用从而实现靶标分子与颗粒的连接，每个颗粒上连接若干个靶标分子，从而实现每种靶标分子都能发光；

（2）在功能化颗粒上的功能基团上标记发光基团，记作功能化且发光化颗粒；将修饰化靶标分子混合物与功能化且发光化颗粒孵育，通过功能基团与修饰基团的相互作用从而实现靶标分子与颗粒的连接，每个颗粒上连接若干个靶标分子，从而实现每种靶标分子都能发光；

（3）在功能化颗粒的内部标记上发光基团，记作功能化且发光化颗粒；将修饰化靶标分子混合物与功能化且发光化颗粒孵育，通过功能基团与修饰基团的相互作用从而实现靶标分子与颗粒的连接，每个颗粒上连接若干个靶标分子，从而实现每种靶标分子都能发光；

（4）制备无关分子，该无关分子不含有靶标位点序列且不能与探针结合，该无关分子被标记上与修饰化靶标分子同样的修饰基团，同时标记发光基团，记作修饰化且发光化无关分子；将修饰化靶标分子混合物、修饰化且发光化无关分子、功能化颗粒共同孵育，每个颗粒连接有若干个靶标分子和无关分子，从而实现每种靶标分子都能发光；

（5）制备结合分子，该结合分子与靶标分子混合物中的一种靶标分子结合、但不与探针序列结合，该结合分子不连接修饰基团但是连接发光基团，记作发光化结合分子；将功能化颗粒和修饰化靶标分子混合物共同孵育，得到孵育产物；将孵育产物与发光化结合分子混匀，使每个颗粒上连接若干个靶标分子，每个颗粒上都有一种靶标分子与所述发光化结合分子，从而实现每种靶标分子都能发光。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述靶标分子为多核苷酸、多肽、蛋白或碳水化合物；

所述多核苷酸具体为通过PCR的方法富集得到的；

所述功能基团为化学功能基团或链霉亲和素、中性链亲和素、卵白亲合素、链亲合素或卵黄亲合素；

所述化学功能基团具体为多核苷酸、蛋白、多肽、碳水化合物、醛基，羟基，羧基，酯键，氨基，磺酸基或巯基；

所述发光基团为荧光团、磷光团或发色团标记；

所述修饰基团为生物素、地高辛、多核苷酸、蛋白、多肽或碳水化合物。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述荧光团为量子点、发光的蛋白质或小分子荧光染料。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述小分子荧光染料为氧杂蒽衍生物、青色素衍生物、萘衍生物、香豆素衍生物、噻二唑衍生物、芘衍生物、恶嗪衍生物、吖啶衍生物、次甲基衍生物、CF染料、Alexa Fluor染料、四氢吡咯衍生物、吖啶橙、DAPI、Hoechst33258、吡罗昔康或奎宁。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述氧杂蒽衍生物为荧光素、罗丹明、俄勒冈绿、曙红或得克萨斯红；

所述青色素衍生物为青色素、吲哚花青绿、羰花青或部花青；

所述萘衍生物为丹磺酰氯或普罗丹；

所述芘衍生物为级联蓝色；

所述恶嗪衍生物为尼罗河红色、蓝色尼罗河、甲酚紫或恶嗪170；

所述吖啶衍生物为二氨基吖啶、吖啶橙或吖啶黄；

所述次甲基衍生物为金胺、结晶紫或孔雀石绿；

所述四氢吡咯衍生物为卟吩或胆红素。