[发明专利]与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记及应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域，具体地涉及一种与中华绒螯蟹生长性状显著相关的EST-SSR分子标记，同时还涉及分子标记在中华绒螯蟹育种中的应用。

背景技术

中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）俗称河蟹，属甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、绒螯蟹属(Eriocheir)，是我国重要经济甲壳动物之一。养殖区遍布我国辽宁、河北、天津、山东、江苏、浙江等沿海省份及广大的内陆地区，据2009年统计资料显示，全国河蟹养殖涉及全国三十个省（市、自治区），面积达66.7万公顷，产量53万吨，产值280亿元，已成为淡水渔业单品种产值最大的产业。

在我国很早就有河蟹养殖，上世纪70年代以前主要是靠采捕天然野生蟹苗进行人工粗放养殖，80年代以增殖放流为主，90年代初随着河蟹育苗技术的突破，河蟹人工苗种规模化生产，河蟹的池塘和湖泊网围养殖开始兴起，并迅速发展。近年来，在市场需求和经济效益的推动下，河蟹人工苗种繁育和成蟹养殖规模不断扩大，河蟹养殖业蓬勃发展，并涌现出各具地方特色的名牌产品，如驰名中外的阳澄湖大闸蟹，独具地方特色的七里海河蟹等。河蟹养殖成为我国渔业生产中发展最为迅速、最具特色、最具潜力的支柱产业，有力地带动了饲料、渔药、餐饮、旅游、贸易等相关产业的发展。

然而，河蟹产业快速发展，苗种生产缺乏必要、规范、科学的技术措施和手段，造成了生长速度缓慢、性成熟个体偏小等种质退化现象的出现。养蟹业的可持续发展是以大量优质高产的苗种为基础的，这就对河蟹育种工作提出了更高要求。生长性状作为育种目标是典型的数量性状，其主要遗传特点是受多基因共同调控，由于环境条件等因素的影响，表现型与基因型之间缺乏明确的对应关系，而传统的育种方法主要依赖于个体表现型间接对基因型进行选择，选择效率低，良种培育周期长，育种效果不佳。消除环境因素影响，提高育种的选择效率与准确性，最理想的方法就是能够直接对基因型进行选择。

分子标记为实现对基因型的直接选择提供了可能，因为分子标记的基因型是可以识别的。如果目标基因与某个分子标记紧密连锁，那么通过对分子标记基因型的检测，就能获知目标基因的基因型。因此，我们能够借助分子标记对目标性状的基因型进行选择，将分子标记应用于育种工作当中。微卫星（Microsatellites）分子标记具有多态性丰富、遵循孟德尔分离定律、共显性遗传等特点，目前已广泛应用于分子标记育种研究中。由表达序列标签（EST）开发获得的EST-SSR标记，在保守性方面更优于基因组微卫星标记，更适用于遗传育种技术领域。吴滟等在一个河蟹群体中对30个全基因组微卫星位点与生长性状进行了相关分析，结果显示其中4个位点与典型生长性状呈显著相关。目前为止，尚未见中华绒螯蟹EST-SSR分子标记与生长性状相关分析的报道。

发明内容

本发明的目的是填补中华绒螯蟹分子育种技术领域生长性状相关EST-SSR分子标记的空白，提供了一种与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记。

本发明的第二个目的在于提供与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记在生长性状育种中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

一种与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记，所述分子标记命名为：SSR1107，由核心序列(TG)_n、上游引物和下游引物组成，所述上游引物是SEQ ID NO.1所示，下游引物由SEQ ID NO.2所示；n=7-9，

一种与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记的应用，包括如下步骤：

（1）在河蟹性成熟群体中随机挑选雌雄个体60只，逐个编号记录；

（2）每只河蟹剪取一只步足，用酚－氯仿法提取肌肉DNA；

（3）利用分子标记SSR1107对所挑选河蟹进行基因分型，保留含有基因型A的个体，作为河蟹育种的亲蟹进行繁育生产；所述基因型A是指分子标记核心序列(TG)_n中的n=7。

本发明的优点：

本发明首次获得了一种与中华绒螯蟹生长性状显著相关的EST-SSR分子标记SSR1107。克服了传统育种方法中，主要依靠表型性状选择，受环境因素影响较大，使生长性状育种不仅难度大，而且效率低的不足。通过应用本发明的与中华绒螯蟹生长性状相关的EST-SSR分子标记，可以快速准确筛选生长性状优良亲本用于河蟹育种，选择目标明确，省时省力。