[发明专利]乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒以及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及乙型肝炎诊断试剂盒，具有设计基于双抗体化学发光原理的乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒及检测方法。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一种传染性疾病。HBV可以通过血液和体液直接传播，常见的传播方式包括输血、注射、伤口接触、母婴传播等；常见的临床症状有不适、发热、黄疸、无症状肝炎、暴发性肝炎以及慢性肝炎等，慢性感染易发展成为肝癌，因此，检测乙型肝炎的工作至关重要。

目前，常用的检测方法是免疫学检测，免疫学检测时基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质，激素等微量生物活性物质。免疫学检测经理了放射免疫检测、酶联免疫检测以及光生物学标记免疫检测技术三个阶段，使免疫学检测向着敏感性、准确性以及操作简捷性的方向发展。

化学发光免疫分析是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。检测原理是以发光物质作为信号放大系统并借助其发光强度直接测定免疫结合。该方法灵敏度高、检测范围宽，是免疫学检测重要的发展方向。

发明内容

本发明解决了现有技术中的不足，提供一种灵敏度高、误差小、安全快速检测的乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒及检测方法。

本发明的技术方案为：一种乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒，其特征在于，包括试剂M、试剂R以及对照品，所述试剂M中组分包括经诊断试剂防腐剂处理的亲和素包被磁微粒，所述亲和素包被磁微粒为通用型磁微粒；所述试剂R中的组分包括生物素化抗-HBe抗体、吖啶酯标记的抗-HBe抗体、MES缓冲液以及诊断试剂防腐剂，所述吖啶酯标记的抗-HBe抗体是以吖啶酯通过二甲基亚胺偶联抗-HBe抗体；所述对照组包括人源性乙肝e抗原、新生牛血清以及诊断试剂防腐剂。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述亲和素包被磁微粒中的亲和素为链霉亲和素、中性亲和素或类亲和素，所述亲和素包被磁微粒中的磁微粒是以四氧化三铁为内核表面包裹活性基团的聚合物。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述抗-HBe抗体为鼠源单克隆抗-HBe抗体。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，试剂R中所述MES缓冲液的浓度为0.05M，pH值为6.0。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述诊断试剂防腐剂为0.1%的Proclin300防腐剂。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述试剂R为23ml，所述试剂M的量为3ml。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述对照品包括对照品1和对照品2两组，所述对照品1的量为0.5ml，浓度为0.0PEIU/ml，所述对照品2的量为0.5ml，浓度为1.5PEIU/ml。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，一种使用该乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒的检测方法，包括以下几步：

（1）在将待测样品和含有生物素化的e抗体（Anti-HBe）及吖啶酯标记的Anti-HBe的试剂R进行反应，形成含有抗体-抗原-抗体夹心复合体的反应液1；

（2）在反应液1中加入含有亲和素包被磁微粒的试剂M，反应液1中的复合体在生物素和亲和素的相互作用下形成固相；

（3）将反应液1置于化学发光测定仪上进行检测，在磁场的检测中的磁微粒将被吸附，通过洗涤液洗涤，将未结合物冲洗除去；然后，注入化学发光激发液1及化学发光激发液2，检测其化学发光光子强度；产生的光强度与样本内乙型肝炎病毒e抗原浓度成正比。

本发明的一个较佳实施例中，进一步包括，所述化学发光激发液1中含有过氧化氢，所述化学发光激发液2中含有氢氧化钠，所述洗涤液含有磷酸盐缓冲液。

本发明的解决了现有技术的缺陷，具有以下有益效果：

1.本发明涉及的乙型肝炎病毒e抗原测定试剂盒，内含有亲和素包被的磁微粒，利用了双抗体化学发光原理（夹心法），在磁场中反应液中的磁微粒会被吸附，通过洗涤将未结合物冲洗除去，然后再注入化学发光激发液检测化学发光光子强度，因为光强度与样本中的乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）浓度成正比，所以很容易就得到样本中的HBeAg浓度，从而可以辅助诊断急性和慢性HBV感染。