[发明专利]一种碱性脂肪酶生产菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种碱性脂肪酶生产菌株及其应用。

背景技术

脂肪酶（Lipase），即三酰基甘油酰基水解酶，可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯类的水解、醇解、酯化、转酯化及酯类的逆向合成反应，除此之外还表现出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、胆固醇酯酶、酰肽水解酶活性等。脂肪酶不同活性的发挥依赖于反应体系的特点，如在油水界面促进酯水解，而在有机相中可以酶促合成和酯交换。脂肪酶的基本组成单位仅为氨基酸，通常只有一条多肽链，其催化活性仅仅决定于它的蛋白质结构。

脂肪酶的性质研究主要包括最适温度与pH、温度与pH稳定性、底物特异性等几个方面。迄今，已分离、纯化了大量的微生物脂肪酶，并研究了其性质，它们在分子量、最适pH、最适温度、pH和热稳定性等方面存在不同。总体而言，微生物脂肪酶具有比动植物脂肪酶更广的作用pH、作用温度范围、高稳定性和活性，对底物的特异性，因此对微生物脂肪酶的开发具有重要的意义。

碱性脂肪酶是指在碱性条件下水解的脂肪酶，它能水解天然油脂，产生脂肪酸和甘油，是一种专门在异相系统油水接口上水解特殊酯类的酶。碱性脂肪酶是一种新型洗涤剂用酶，主要用途是作为洗涤剂的新酶种。它的特性是能分解衣物油污成甘油二酯、甘油单酯及脂肪酸等较易溶于水的物质，从而显著提高洗涤剂的效果，尤其是去除黄斑的效果。此外，碱性脂肪酶还可应用于纺织、食品、纤维及造纸工业领域。因此，碱性脂肪酶具有更广的应用价值，成为目前研究的热点之一。

发明内容

本发明为解决现有技术问题，提供了一种碱性脂肪酶生产菌株及其应用。本发明通过构建含有圆弧青霉（Penicillium cyclopium）的脂肪酶基因的表达质粒，转化入毕赤酵母中，从而获得高效重组表达该碱性脂肪酶的毕赤酵母工程菌株，从而弥补现有技术的不足。

本发明一方面提供了一种工程菌，其携带有表达脂肪酶的重组质粒。

所述工程菌为毕赤酵母ALip (Pichia pastoris ALip)。

所述脂肪酶的氨基酸序列为SEQ ID NO: 1。

所述脂肪酶的编码核苷酸序列为SEQ ID NO: 2。

本发明另一方面提供了上述工程菌在生产脂肪酶中的应用。

本发明构建的毕赤酵母工程菌能高效表达来源于圆弧青霉的碱性脂肪酶基因，摇瓶发酵酶活可达1630U/mL；本发明的重组碱性脂肪酶的最适作用pH为8.5，最适温度为35℃。本发明所述的含有碱性脂肪酶的洗涤剂组合物去污力强，对国际污布EMPA116及EMPA117上的去污效果要好于竞争产品，且对环境的污染小，具有很高的推广应用价值。

附图说明

图1为毕赤酵母工程菌ALip发酵上清液SDS-PAGE电泳检测分析图，其中泳道1为毕赤酵母工程菌ALip发酵上清液，泳道2为对照组，箭头所指处的条带即为本发明的重组脂肪酶。

具体实施方式

本发明用到了遗传工程和分子生物学领域使用的常规技术和方法，例如MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3nd Ed. (Sambrook, 2001)和CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (Ausubel, 2003)中所记载的方法。这些一般性参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。但是，这并不意味着将本发明限定于所述的任何具体方法、实验方案和试剂，因为它们可以改变。

除非在本文中另作限定，本文所用的全部技术术语和科学术语具有本发明所属领域的普通计数人员通常所理解的相同含义。DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 3nd Ed. (Singleton et al., 2006)和COLLINS DICTIONARY BIOLOGY (Hale et al., 2003)为技术人员提供了本发明中所使用的许多术语的一般性解释。

    下面结合具体实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1 碱性脂肪酶基因的克隆