[发明专利]一种海洋微生物长孢葡萄穗霉菌株及产出的纤溶活性化合物

权利要求书

1.一种海洋微生物长孢葡萄穗霉菌株,其特征在于，海洋微生物长孢葡萄穗霉菌株（Stachybotrys longispora）FG216，,保藏号为CCTCC：M2012227。 

2.一种权利要求1海洋微生物菌株FG216产生的纤溶活性化合物，其特征在于，是通过以下步骤制备的： 

1）.菌种分离：含1%琼脂的马铃薯蔗糖培养基，用海水配制，pH自然，121℃灭菌20分钟，例平板，冷却后以200μl的样品量涂布每个平板，25℃培养5天后分离得到单菌。 

2）.分离得到的单菌落保藏于马铃薯蔗糖斜面培养基。 

3.发酵培养基的制备：蔗糖50g,硝酸钠3g,磷酸氢二钾0.1g,硫酸镁0.5g,氯化钾0.5g,酵母提取物1g,氯化钴0.0025g,硫酸亚铁0.015g,氯化钙0.0065g,蒸馏水1000mL,pH5.8。 

4.菌株培养：培养温度25℃，180rpm，培养3天后加入培养液体积1%的赖氨酸，继续培养2天。 

5.活性物质提取：加入等体积的纯甲醇，超声提取15分钟，10000rpm离心15分钟，上清液在40－60℃条件下减压浓缩至干，浓缩物真空干燥。 

6.96孔平板孔内注入纤溶酶原溶液、单链尿激酶型纤溶酶原激活剂溶液、牛血清白蛋白和发色底物溶液各10μl，其浓度分别为0.1、0.1mg/mL、500nmol/mL和1mmol/mL,加入样品溶液10μl后成50μl反应体系；在37℃于405nm处连续150分钟测定吸光度的变化。 

7.促纤溶活性化合物的纯化：FG216发酵培养结束后，三角瓶中加入等体积的100%的甲醇，超声提取15min，在转速10000rpm的条件下离心15min，过滤，弃去沉淀，上清液在40-60℃的条件下减压浓缩至干，浓缩物真空干燥12h，残留物溶于少量甲醇，过滤弃去沉淀，收集上清液，再减压浓缩，真空干燥；所得残留物溶于少量甲醇，用于HPLC分离采用岛津SCL-10Avp HPLC分离系统，样品在流速10mL/min，检测波长265nm的条件下被色谱柱Sepax HP-C18柱(21.2×250mm，10m)两次精制，第一次流动相为甲醇∶0.05mol/L乙酸铵=80∶20，第二次流动相为乙腈∶ 0.1%甲酸=40∶60，用Sepax HP-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5m)鉴定所得化合物的纯度。