[发明专利]一种基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法

权利要求书

1.一种基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，以Fe₃O₄磁性纳米颗粒为固相载体进行筛选，包括如下步骤：

步骤一、制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒，在所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒表面包覆一层硅壳，得到Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒，再对Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面羧基化修饰，得到羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒；

步骤二、对步骤一制备的羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒进行羧基活化，之后将活化的羧基化Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒与HBsAg偶联，得到偶联HBsAg的磁性纳米颗粒；

步骤三、将步骤二制备的偶联HBsAg的磁性纳米颗粒通过SELEX技术筛选特异识别HBsAg的核酸适体；

步骤四、将步骤三筛选出的产物进行克隆、测序，并对测序获得的HBsAg核酸适体进行二级结构分析预测。

2.根据权利要求1所述的基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，步骤三所述SELEX技术筛选特异识别HBsAg的核酸适体，包括如下步骤：将偶联HBsAg的磁性纳米颗粒与随机单链DNA文库进行孵育，并加入tRNA进行竞争结合，然后通过磁分离弃掉未结合的非特异性DNA序列，再将与HBsAg特异结合的DNA序列洗脱下来，然后以洗脱下的DNA序列为模版进行非对称性扩增，扩增出来的单链DNA作为下一轮筛选的文库，重复上述筛选过程；将最后一轮筛选出的DNA序列经PCR扩增及纯化后用于克隆、测序。

3.根据权利要求1或2所述的基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，步骤一所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒采用软模板法制备，所述Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒经种子聚合法和经典法制备。

4.根据权利要求1或2所述的基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，步骤一所述Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面羧基化修饰是先将Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米颗粒表面氨基化，再利用丁二酸酐进行表面羧基化修饰。

5.根据权利要求1或2所述的基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，步骤二所述活化方法为碳化二亚胺一步法活化羧基。

6.根据权利要求1或2所述的基于磁分离的HBsAg核酸适体筛选方法，其特征在于，步骤四所述二级结构分析预测采用DNAMAN软件进行分析。