[发明专利]一种人呼吸道博卡病毒半巢式PCR检测试剂盒及其非诊断性检测方法

权利要求书

1.一种人呼吸道博卡病毒半巢式PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：1)病毒保护液，其成份为青霉素200U／ml、链霉素200U／ml、两性霉素B200U／ml和BSA0.125％；2)病毒裂解液，其成份为10mmol Tris-HCl、1mmol EDTA、15mmol NaCl和0.5％SDS，pH为8.0，溶剂为水；3)扩增引物，扩增引物为NS1545F：5-TATGGCCAAGGCAATCGTCCAAG-3、NS1962R：5-CAGAGTACAGTCGTACTCATTC-3和NS1835R：5-GCCGCGTGAACATGAGAAACAGA-3。

2.根据权利要求1所述的人呼吸道博卡病毒半巢式PCR检测试剂盒的非诊断性检测方法，其特征是，提取患者的呼吸道分泌物，然后加入等体积的病毒保护液，混匀；取80μl病毒保护液稀释的样本加入20μl病毒裂解液，吹打混匀；100℃水浴5分钟，10000rcf离心5分钟，收集上清液，进行半巢式PCR扩增，扩增结束，将扩增产物在琼脂糖凝胶上进行电泳，电泳结束，在凝胶成像系统观察扩增产物。

3.根据权利要求2所述的非诊断性检测方法，其特征是，半巢式PCR扩增步骤为：1)第一轮扩增，取3μl病毒裂解上清液作为扩增模板，扩增引物为NS1545F和NS1962R；引物的最终浓度为400nM，dNTPs0.2mM，5U DNA聚合酶；扩增条件为95℃5分钟后，95℃30秒，56℃35秒，72℃40秒，共35循环，最后72℃延伸10分钟；2)第二轮扩增，取第一轮扩增产物2μl作为扩增模板；扩增引物为NS1545F和NS1835R；引物的最终浓度为400nM，dNTPs0.2mM，5U DNA聚合酶；扩增条件为：扩增条件为：95℃，5分钟后，依次95℃30秒，58℃35秒，72℃40秒，共35循环，最后72℃延伸10分钟。