[发明专利]一种表达胸腺素β4的基因工程菌的制备及应用方法

权利要求书

1.一种表达胸腺素β4的基因工程菌的制备方法，其特征在于，该制备方法包含：

步骤1，合成能够在大肠杆菌内高效表达的胸腺素β4基因序列；

步骤2，将步骤1所得的基因重组进经虾碱性磷酸酶I酶切的pTWIN 1质粒载体，得到pTWIN-胸腺素β4融合载体；

步骤3，以步骤2所得的pTWIN-胸腺素β4为模板，PCR扩增该载体上的内含肽序列以及胸腺素β4序列；

步骤4，将步骤3所得的基因序列重组进经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切的质粒pET-28a中，得到pET-胸腺素β4表达载体；

步骤5，将步骤4所得的pET-胸腺素β4转化至感受态大肠杆菌细胞BL21中，得到pET-胸腺素β4工程菌；

步骤6，在pET-胸腺素β4工程菌菌液的OD₆₀₀值为0.4-0.6时，加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导胸腺素β4表达。

2.一种根据权利要求1所述的方法制备的表达胸腺素β4的基因工程菌的应用方法，其特征在于，所述的使用方法包含以下步骤：

步骤a，将制得的表达胸腺素β4的基因工程菌的菌液进行离心，收集菌体并经超声波破碎，再离心收集上清；

步骤b，将所得的上清过镍柱纯化，得到胸腺素β4-内含肽的融合蛋白；

步骤c，将纯化后的胸腺素β4-内含肽进行诱导切割，使其释放胸腺素β4，再通过液相色谱-质谱联用技术鉴定分子量。