[发明专利]一株对花生果腐病具有防效的金龟子绿僵菌及其发酵工艺

说明书

技术领域

本发明涉及微生物防治领域，特别涉及金龟子绿僵菌菌株、液固双向发酵工艺及发酵菌剂在防治花生果腐病中的应用。

背景技术

花生果腐病为一种花生生长中后期发生的土传病害，是由侵脉新赤壳菌（Neocosmosporasp.）侵染花生果而引起花生果腐烂的一种病害，该病害发病特征如下：（1）发生病变的荚果主要是中后期的秕果和饱果；（2）初步发生时，花生荚果的中果皮和外果皮变为黑褐色斑点，内果皮及种子正常；（3）发病严重时，荚果的整个果皮和种子变黑、腐烂；（4）根部外表皮发黑，而地上部分不变或者更绿。2006～2011年，该病害在我国河北、山东、吉林、河南等花生种植区先后被发现，烂果率在30～100%，这严重损害了当地花生种植户的利益。目前市场上还没有有效的防治该病害药物。因此，提供一种能够有效防治花生果腐病的药物具有重要现实意义。

绿僵菌作为当今世界应用最为广泛的一种昆虫病原真菌，因对昆虫的致病力强、寄主范围广，对人、畜、作物无毒害而受到人们的重视。目前，已经发现金龟子绿僵菌能够寄生的昆虫约有200余种，许多国家对它们在生产、应用和安全性等方面都做了大量细致的研究，对有些害虫已开发出绿僵菌杀虫剂，并收到良好防治效果。近年来，科研人员发现绿僵菌对植物病原菌也有一定的抑制作用，田间试验表明部分绿僵菌制剂对植物病害具有良好的防治效果。因此，急需一种能够实现持续控制花生果腐病和地下害虫，降低花生果农药残留，实现防病虫、保果、增产作用的绿僵菌生物制剂。目前还未见绿僵菌对花生果腐病有防治作用。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一株金龟子绿僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的应用。该金龟子绿僵菌的保藏编号为CGMCC No.8385。该金龟子绿僵菌菌株能够持续控制花生果腐病，降低花生果农药残留，实现防病、保果、增产。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一株金龟子绿僵菌，其保藏编号为CGMCC No.8385。

该菌株ITS 在GenBank 序列登记号为KF913494。

本发明的金龟子绿僵菌，菌落绒毛状或棉絮状，最初白色，产生孢子时呈绿色；菌丝具分隔和分枝，透明，直径1.5～2.0μm；分生孢子梗很难与菌丝区别，直径约2.0μm，其末端产生瓶形小梗，（8.0～16.0μm）*（1.5～2.2）μm，从瓶梗的末端以向基式连续形成长串链的分生孢子；在同一小梗上，第一层分生孢子后面形成第二层、第三层分生孢子，呈现一系列念珠状排列的孢子；分生孢子为单细胞，长椭圆形，两端钝截形或钝圆，大小变化很大，（5.0～7.0）μm*（2.0～3.0）μm，单个存在时色亮，成堆时呈橄榄绿色，脱落的孢子常聚成菱形孢子团块或壳状结构；平皿对峙实验表明该菌对花生果腐病菌具有明显的抑制作用。

本发明还提供了保藏编号为CGMCC No.8385的金龟子绿僵菌在制备抑制花生果腐病菌药物中的应用。

本发明还提供了一种菌剂，其包括保藏编号为CGMCC No.8385的金龟子绿僵菌及菌剂中可接受的佐剂。

作为优选，所述金龟子绿僵菌的含量≥10⁸ 孢子/克。

本发明还提供了上述菌剂的液固双向发酵工艺，包括如下步骤：

步骤1：挑取保藏编号为CGMCC No.8385的金龟子绿僵菌接种于PPDA固体培养基上，于24～30℃培养9～12d，刮取孢子置于研磨器中，用0.05%吐温-80无菌水配制成浓度为1～5×10⁸个/mL的孢子悬液，得第一培养物；

步骤2：吸取2～4mL第一培养物，置于SDAY改良液体培养基中，于25～30℃、160～200 rpm培养70～75h，得第二培养物；

步骤3：将14～16mL第二培养物做为固态发酵的种子液转接至80～100克/袋的固态发酵培养基中，混匀后于25～30℃培养6～9 d后即得。所述固态发酵培养基包括：麦壳1～3重量份，麦麸6～10 重量份，水87～93 重量份。

作为优选，上述菌剂的施用量为1～10万亿孢子/亩。

本发明提供一株金龟子绿僵菌菌株及其在防治花生果腐病中的应用。该金龟子绿僵菌的保藏编号为CGMCC No.8385。包含保藏编号为CGMCC No.8385的金龟子绿僵菌的菌剂按1～10万亿孢子/亩穴施于花生，田间防病试验表明对花生果腐病的防治效果60%以上，增产5～12%，实现了在控制病害的同时，达到保果，增产的目的。本发明涉及的金龟子绿僵菌能对花生果腐病有良好的防治效果；其次，该菌株还具有促生增产作用；同时，该菌剂无毒无致病性，对人畜安全，不污染环境，生产成本低。