[发明专利]一种多肽修饰的CdTe量子点的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明提供了一种多肽修饰的CdTe量子点，尤其涉及CLV3十二肽修饰的CdTe量子点，并且提供了该量子点在制备荧光探针中的用途，属于生物技术领域。 

背景技术

植物干细胞数目的维持和稳定对植物的生长发育以及农作物的性状起着关键作用。干细胞自动动态平衡（homeostasis）的维持依赖于根端或茎端干细胞和其下方的组织中心（OC）细胞（干细胞龛）之间的信息交流。如何有效捕捉这些信息对理解这种动态平衡的维持具有重要意义。信息交流的捕获，需要对植物根端或茎端分生组织中不同区域的干细胞进行标记，才能更好地理解干细胞动态平衡维持的信号机制。而如何对植物分生组织中不同区域的干细胞进行标记成为了一个难题，目前尚无一种专门针对此类研究的荧光探针，因此发明一种能够对植物茎端分生组织中不同区域的干细胞进行标记的荧光探针成为了一个难题。为解决这一问题，本发明用量子点纳米技术，合成一种荧光荧光探针，对干细胞进行标记。 

CLV3是一种分泌性的多肽，在加工分泌过程中被水解为12个氨基酸组分的活性多肽。曾有研究者构建CLV3基因和绿色荧光蛋白（GFP）基因的融合基因在追踪CLV3的分泌过程。但这种方法不能真正反映CLV3多肽分泌的真实全貌。原因有：①构建的融合蛋白有在运输和加工过程中被水解，追踪到的荧光信号是GFP的信号而非活性多肽的信号；②融合蛋白中的GFP比12个氨基酸的活性多肽的分子量大的多，它可能会干扰小分子多肽的功能。因此，寻找分子量更小的量子点作为CLV3的荧光标签就成为一种不二选择。 

发明内容

本发明解决了上述背景技术中的不足，提供了一种CLV3十二肽修饰的CdTe量子点的制备方法，采用该量子点所制备的荧光探针，以其作为具有活性功能的配体信号，对植物根端分生组织中不同区域的干细胞进行标记，为理解干细胞动态平衡维持的信号机制提供分子细胞学方面的直接证据。 

实现本发明上述目的所采用的技术方案为： 

一种CLV3十二肽修饰的CdTe量子点的制备方法，包括以下步骤：(1)、采用一锅法合成CdTe量子点；(2)、采用芴甲氧羰基固相肽合成法合成CLV3十二肽，采用反向HPLC进行纯化，纯化后制得纯度大于98%的CLV3十二肽，其氨基酸序列为 NH2-RTVPSGPDPLHH-COOH；(3)、采用零距离偶联法将CLV3十二肽连接到量子点CdTe的表面，从而制得CLV3十二肽修饰的CdTe量子点。 

所述步骤(1)中，CdTe量子点的合成方法具体如下：首先将CdCl₂溶液与巯基乙酸混合均匀，并在混合液中持续通入高纯氮气保持混合液冒泡状态；然后采用碱性溶液将混合液的pH调节至碱性，直至混合液变澄清后停止调节；将柠檬酸三钠和Na₂TeO₃溶液添加至混合液中，最后加入NaBH₄，混合均匀后得到反应液，并停止通入氮气；将反应液移置反应釜中，在95-105℃的条件下反应1-2h；反应结束后在反应液中加入过量丙酮，生成沉淀，将沉淀离心分离后收集，所得沉淀即为CdTe量子点，最后将沉淀用超纯水重悬后放置于冰箱中冷藏。 

所述步骤(2)中，采用ABI433A型多肽合成仪进行合成，纯化时采用反相HPLC进行，反相HPLC包含两个溶剂输送泵，检测波长为220nm，多肽纯度用220nm紫外吸收值测定和全离子液相色谱-质谱的方法的分析。 

所述的零距离偶联法的步骤如下：将碳化二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、2-吗啉乙磺酸缓冲液以及去离子水加入到CdTe量子点溶液中，搅拌反应后制得混合物；将混合物离心除去过量的试剂，所剩余的沉淀用双蒸水洗涤后，再向沉淀中加入CLV3十二肽、双蒸水以及硼酸钠缓冲液，得到混合溶液；将混合溶液用超声波在25℃条件下温育2h，然后将混合溶液在4℃条件下储存过夜，混合溶液中过量的多肽通过离心的方法除去，即可制得CLV3十二肽修饰的CdTe量子点。 

本发明中用琼脂糖凝胶电泳检测CdTe量子点和CLV3十二肽的偶联效果，电泳条带用凝胶成像系统进行成像。 

上述CLV3十二肽修饰的CdTe量子点能够应用于荧光探针中，对对细胞进行荧光标记。 

在本发明中，以新型的纳米晶体荧光探针——量子点技术为手段，用具有生物功能的多肽分子和量子点进行化学偶联，所制备出多肽修饰的量子点，采用该量子点作为荧光探针对细胞进行荧光标记，能够对植物根端分生组织中不同区域的干细胞进行标记，为理解干细胞动态平衡维持的信号机制提供分子细胞学方面的直接证据。