[发明专利]采用反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒的方法

权利要求书

1.一种采用反转录环介导等温扩增技术检测芜菁花叶病毒(TuMV)的方法，其中该方法包括芜菁花叶病毒总RNA提取，RT-LAMP反应和实时浊度检测以及电泳检测，所述RT-LAMP反应采用的引物组如下： 

引物组，用于TuMV病毒的RT-LAMP反应： 

外引物(F3和B3)： 

SEQ ID NO.1：5’-CGGAACCTCCCCGAACAT-3’： 

SEQ ID NO.2：5’-ATCGAGCTAAGCTCATGTCG-3’： 

内引物(FIP和BIP)： 

SEQ ID NO.3：5’-GTTTGGCGTGGTCAATGAGCGAAACGGAATGTGGGTGATGA-3'： 

SEQ ID NO.4：5’-GGCCCATTTCAGTGACGTAGCTCTGAAGACCATATCGTGGCA-3’：。 

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述引物组包含所述全部4组引物SEQ ID NO.1-4。 

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中该方法包括如下步骤： 

1)病毒总RNA的提取： 

提取待测样品总RNA； 

2)RT-LAMP反应： 

使用外引物(F3和B3)和内引物(FIP和BIP)对病毒总RNA进行RT-LAMP反应，得到扩增产物； 

3)浊度检测： 

对扩增产物进行浊度观察，确定样品是否感染所述病毒； 

4)电泳检测： 

对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，获得病毒基因扩增产物条带，确定样品是否感染TuMV病毒。 

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中所述RT-LAMP反应中使用的引物浓度比例为：外引物(F3和B3)：内引物(FIP和BIP)=0.2-0.4：1.2-1.6。 

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，其中所述RT-LAMP反应中的引 物浓度为外引物(F3和B3)：内引物(FIP和BIP)=1：4。 

6.权利要求3所述的方法，其特征在于，其中所述RT-LAMP反应中的反应温度为50-62℃。 

7.权利要求6所述的方法，其特征在于，其中所述RT-LAMP反应中，TuMV引物使用的反应温度为62℃。 

8.权利要求3所述的方法，其特征在于，其中所述RT-LAMP反应中的Mg²⁺浓度为高于或等于5mM。 

9.权利要求8所述的方法，其中RT-LAMP反应中的Mg²⁺浓度为5mM。