[发明专利]一种真核重组表达载体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201310659786.3 | 申请日： | 2013-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN104694567A | 公开（公告）日： | 2015-06-10 |
| 发明（设计）人： | 万晓春;吕卫东 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 表达 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种真核重组表达载体，其特征在于，所述真核重组表达载体为在真核表达载体的多克隆位点插入鼠IgG2b-Fc基因，所述真核表达载体为pcDNA3.1质粒、P3X质粒或plexm质粒。
2.如权利要求1所述的一种真核重组表达载体，其特征在于，所述鼠IgG2b-Fc基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
3.如权利要求1所述的一种真核重组表达载体，其特征在于，所述真核表达载体的多克隆位点为pcDNA3.1质粒的Not Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点。
4.一种如权利要求3所述的真核重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）、提取鼠脾脏的总RNA，随后进行反转录合成cDNA；
（2）、设计鼠IgG2b Fc的上游引物和下游引物，并以步骤（1）所得cDNA为模板，扩增鼠IgG2b Fc目的基因片段；
（3）、取pCDNA3.1质粒，将步骤（2）扩增得到的鼠IgG2b Fc目的基因片段和所述pCDNA3.1质粒利用相同的内切酶分别进行双酶切反应，纯化回收后进行连接，得到所述真核重组表达载体，所述真核重组表达载体为含有鼠IgG2b-Fc基因的pcDNA3.1表达载体。
5.如权利要求4所述的一种真核重组表达载体的制备方法，其特征在于，所述鼠IgG2b Fc的上游引物的碱基序列如SEQ ID NO:2所示，所述鼠IgG2b Fc的下游引物的碱基序列如SEQ ID NO:3所示。
6.如权利要求5所述的一种真核重组表达载体的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述双酶切反应所采用的内切酶为Not Ⅰ和Xba Ⅰ内切酶。
7.如权利要求7所述的一种真核重组表达载体的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述鼠IgG2b-Fc基因的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
8.含有如权利要求1所述的真核重组表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为CHO或293细胞。
9.如权利要求1～4任一所述的真核重组表达载体在表达含Fc端融合蛋白中的应用。
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