[发明专利]一种天然抗菌肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体的说是一种天然抗菌肽QHA及其应用。

背景技术

近年来传统抗生素的大规模滥用导致越来越严重的病原微生物耐药问题，给人类健康带来巨大的威胁。临床上应对耐药微生物感染的措施是使用对耐药微生物尚未使用过的新的或者替代性的抗生素，因此这就需要持续开发新的抗微生物药物。

抗菌肽是生物体基因编码的一种天然小分子多肽，是生物体免疫系统的一种重要分子，对细菌、真菌、病毒甚至原虫均具有直接的杀灭作用。抗菌肽具有分子量小、结构简单、抗菌活性强、杀菌机制独特、毒性低和不易引起耐药性等优点，因此自发现之日起就被认为是具有极大开发潜力的新一代抗生素。到目前为止，已从不同生物体中发现超过1500多种不同的抗菌肽，而且其数目还在增加。

发明内容

本发明的目的在于提供一种天然抗菌肽QHA及其基因和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种天然抗菌肽QHA，天然抗菌肽QHA由30个氨基酸残基组成，为直链多肽，分子量3628.5Da，等电点12.61，其氨基酸序列由SEQ ID NO.1所示。

所述编码天然抗菌肽QHA的前体的基因自5’端至3’端的碱基序列由SEQ ID NO.2所示。

所述SEQ ID NO.2所示碱基序列可应用于多肽重组表达，转基因动物、植物、植物部分、动物细胞或植物细胞中。

一种天然抗菌肽QHA的应用，所述天然抗菌肽QHA可制备抗菌药物、抑制细菌生长药物、防腐剂、动物饲料或化妆品前体。

所述天然抗菌肽QHA可用于制备抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌或真菌的药物或组合物。

本发明所具有的优点：

本发明所述天然抗菌肽QHA具有分子量小、化学合成方法简单、抗菌作用广谱高效、稳定性好等有益特点，具有广泛的应用前景。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1

天然抗菌肽QHA编码基因的克隆：

1）青环海蛇毒腺总RNA提取：

①取250mg青环海蛇毒腺组织，放入研钵中加入液氮研磨成粉末，转移到EP管中，加入1m1总RNA提取试剂(Trizol，美国Invitrogen公司产品)，充分混匀，而后于4℃，12000rpm离心10min。

②离心取上清，加入0.2ml氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10分钟，而后以4℃，12000rpm离心10分钟，弃除沉淀。

③上清加入等体积的异丙醇，室温放置10分钟，以4℃，12000rpm离心10分钟，收集沉淀用75%（V/V）乙醇洗一次，晾干，管底沉淀物即为青环海蛇毒腺总RNA。

2）青环海蛇毒腺cDNA文库构建：采用CLONTECH公司In-Fusion SMARTer ^TM Directional cDNA Library Construction Kit构建。

（1）cDNA第一链合成(mRNA反转录)：

①经DEPC处理（DEPC处理是在含0.1%（V/V）DEPC的水浸泡过夜，高压灭菌，烘干）的离心管中加入1μl青环海蛇毒腺总RNA、1μl3’端一链合成引物（3’In-Fusion SMARTer CDS Primer）和2.5μl经DEPC处理（DEPC处理是将含0.1%（V/V）DEPC的水，放置过夜，高压灭菌）的水使总体积达到4.5μl，混匀后短暂离心（2000rpm，30s），离心后于72℃保温3分钟；保温后再将离心管在42℃孵育2分钟。