[发明专利]可辨认感染性普立昂蛋白质的单株抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明关于可专一性辨认感染性普立昂蛋白质(scrapie prion protein,PrP^Sc)的单株抗体，特别地，是关于可与普立昂蛋白质C端以β褶版(βsheet)为主的片段结合的单株抗体，及其用于检测普立昂疾病的用途。

背景技术

普立昂疾病(prion diseases)又称作传染性海绵体脑部病变(Transmissible spongiform encephalopathies,以下简称TSE)，病理特征是在脑部会出现海绵状空洞、神经元细胞死亡、星状细胞增生、组织染色出现淀粉斑块(amyloid plaque)；临床特征通常在长时间的潜伏下会出现渐进式的行为、运动失调、痴呆等(Ludlam,C.A.,Lancet351:1289-1290,1998;Soto,C.,Nature reviews Microbiology2:809-819,2004)，虽与其他神经性退化疾病如阿兹海默(Alzheimer disease)、帕金森氏症(Parkinson disease)相似，但是独特的地方在于其具有传染性，会严重影响动物如羊骚痒症(Scrapie)、狂牛症(bovine spongiform encephalopathy,以下简称BSE)，以及人类如库贾氏症(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)、-Straussler-Scheinker氏症(GSS)、致死性家族失眠症(Fatal familial insomnia,FFI)等。人类的普立昂疾病的致病原因可分为遗传性：GSS、FFI、fCJD；后天获得：Kuru、iCJD、vCJD；未知：sCJD，动物则是因为有吃自己同类尸体的习惯，而有传染性貂脑病变(Transmissible mink encephalopathy)，及因牛误食羊骚痒症(Scrapie)的羊制成的肉骨粉，而产生的狂牛症(BSE)。

在公元1986年，英国首次爆发从未出现过造成大量牛只死亡的疾病，即为后来所知的狂牛症(Wells,G.A.,et al.,The Veterinary record121:419-420,1987)，接着几年也开始在其他国家陆续出现案例，造成大规模流行。目前研究显示，BSE的爆发可能是因为在作为牛饲料添加的肉骨粉中，含有大量的羊搔痒症病原所致，这也暗示TSE似乎会跨越种别差异，而造成另一物种的疾病发生，人类的库贾氏病在1920年代初期被发现，为一种相当罕见的疾病，发生率约为每百万人口0.5～1名病例。此病的病理症状与狂牛症类似。

过去几年来各国已经确信BSE是严重的问题，目前在病原的鉴定上，主要的检体来源都是“死后”的脑部组织，仅可由严重感染的牛只脑部组织做成乳剂后，以人工接种感染小鼠来证实BSE的病原是可传播感染的；但这类接种感染的方式却最少须150几天的感染期才能证实有无感染成立。而现今WHO及OIE所承认的诊断方法，是以死后检查临床疫情、症状、显微病理变化、免疫组织化学染色技术及西方免疫墨点转渍法等，来作为普立昂疾病的诊断依据(Hardt,M.,et al.,Journal of comparative pathology122:43-53,2000;Ingrosso,L.,et al.,Trends in molecular medicine8,273-280,2002)。以下将分别叙述现有常用的几个TSE检测方法:

1.西方免疫墨点转渍法：原理是依据PrP^Sc被蛋白酶K水解后会产生27～30kDa(PrP^res)大小的讯号，将脑组织均质液与蛋白酶K反应后，接着利用单株抗体6H4(抗原决定位:DYEDRYYRE)侦测，此方法的好处是可以减少检测上的错误率，因为相对于用酵素免疫分析法(ELISA)全长PrP^C部分没被水解掉进而干扰PrP27-30讯号的现象，此外也可以发现新的PrP^Sc种(strain)。

2.CEA/BioRad检测：是将脑组织先经过一连串去活性(denaturation)及浓缩步骤后，进行利用两种单株抗体三明治型的酵素免疫分析法。此方法较其他方法的侦测灵敏度高，可到0.5-2.0pmol，但是相对于其他方法，从纯化到浓缩脑组织液需要耗费相对多的时间及人力，也同样有会受到未完全被水解掉的PrP^C片段干扰的困扰。