[发明专利]金黄色葡萄球菌mSEB突变体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种金黄色葡萄球菌（SA）的SEB蛋白突变体mSEB。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)，以下简称金葡菌，有“嗜肉菌”的别称。作为革兰氏阳性菌的代表，它是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。感染以急性、化脓性炎症为特征，局部感染可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身感染可导致骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、肺炎、脓毒血症等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金葡菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。

随着抗生素长期、广泛地使用，细菌耐药性问题日益突出，作为典型代表的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）自1961年被首次发现至今，目前已成为全球ICU病房、术后感染、烧伤、战创伤等感染率最高的医院內感染病原菌之一。同时，因其致病性强、传播途径广泛、易暴发流行，且呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，被称为“第一超级细菌”。

因此，加强对金葡菌感染的免疫防治研究，研制安全、有效的新型金葡菌基因工程疫苗将对有效控制金葡菌耐药性蔓延和临床金葡菌广泛感染具有重要的战略及现实意义。

金葡菌肠毒素（SE）是超抗原外毒素，通常由致病性金葡菌特别是MRSA产生。SE可通过促使多数T细胞释放大量细胞因子而产生生物学效应，引起毒素休克综合征等临床症状。目前SE有SEA、SEB、SEC、SED和SEE等9个血清型。SEB既是毒素也是超抗原，50%的金黄色葡萄球菌菌株能产生SEB。SEB不但能导致胃肠炎性食物中毒，也能刺激非特异性T细胞增殖。有研究表明，SEB可以通过消化道吸收入血，到达中枢神经系统刺激呕吐中枢而导致呕吐症状食物中毒；SEB进入机体后结合MHCⅡ类分子，在不依赖抗原识别的情况下通过结合T细胞抗原表位激活T细胞，从而刺激T细胞大量增殖和炎症因子的释放。SEB中毒后所引发的毒素休克综合征死亡率高达50%，如与流感并发，病死率可达90%以上，其也被作为一种重要的失能性生化武器。因此，针对SA重要的毒力靶点，研发具有自主知识产权、高效、安全无毒、经济的SA疫苗对控制SA感染、毒素扩散、耐药性发展及生物恐怖防御具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种金黄色葡萄球菌B型肠毒素的无毒性、无超抗原性的mSEB突变体重组蛋白，其可应用于检测、预防和治疗与金黄色葡萄球菌感染相关的生物制品。

在本发明的一个方面，提供一种mSEB重组蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

在本发明的第二个方面，提供编码本发明的mSEB重组蛋白的核苷酸序列，以及包含所述核苷酸序列的载体和宿主。

在本发明的第三个方面，提供一种制备本发明的mSEB重组蛋白的方法。

在本发明的第四个方面，提供一种发酵mSEB宿主（基因工程菌）以制备mSEB重组蛋白的方法。

在本发明的第五个方面，提供一种纯化本发明的mSEB重组蛋白的方法。

在本发明的第六个方面，提供本发明的mSEB重组蛋白作为抗原的应用，以及所述mSEB重组蛋白在制备用于检测、预防或治疗SA感染的生物制品中的应用。

在本发明的第七个方面，提供由本发明的mSEB重组蛋白免疫产生的多克隆抗体以及所述多克隆抗体在制备用于检测、预防或治疗SA感染的生物制品中的应用。

在本发明的第八个方面，提供包含本发明的mSEB重组蛋白的组合物或试剂盒，优选地，所述组合物是疫苗。

本发明采用基因工程技术克隆表达金黄色葡萄球菌mSEB突变体重组蛋白，表达量高，便于分离纯化，而且高效、安全。mSEB重组蛋白可以直接与佐剂（如Al(OH)₃、AlPO₄、MF59、AlSO₃、AlSO₄、不完全弗氏佐剂、完全弗氏佐剂、分枝杆菌卡介苗佐剂等）配合使用，适用于注射免疫接种。可有效激发机体产生保护性免疫应答，从而抵抗SA感染，且安全有效、质量可控。

附图说明

图1、mSEB基因片段的PCR扩增结果；M：DNA分子量标准；1：mSEB基因片段(743bp)PCR产物。

图2、表达载体pGEX-6p-2-mSEB的酶切鉴定结果；M：DNA分子量标准；1～3：重组表达质粒经酶切后（片段4958bp和734bp）。