[发明专利]金黄色葡萄球菌MntC重组蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌的MntC重组蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.编码如权利要求1所述的MntC重组蛋白的核苷酸序列，优选地，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种包括如权利要求2所述的核苷酸序列的载体或宿主；优选地，所述载体是pGEX或pET系列表达载体，进一步优选地，所述载体是表达载体pGEX-6P-2；优选地，所述宿主是大肠杆菌XL1-Blue。

4.一种制备如权利要求1所述的Mnt C重组蛋白的方法，所述方法为化学合成法或核苷酸表达法；优选地，所述方法包括步骤：1）根据野生MntC蛋白的编码序列（SEQ ID NO.5）设计正向、反向引物扩增编码MntC蛋白的基因片段；优选地，所述正向引物如SEQ ID NO.3所示，所述反向引物如SEQ ID NO.4所示；2）对MntC蛋白的密码子进行优化，具体为，将MntC蛋白编码序列（SEQ ID NO.5）的第9位密码子（编码Leu）优化为CTG，第13、14位密码子（编码Thr）优化为ACC，第27、65、282位密码子（编码Gly）优化为GGT，第214个密码子（编码Arg）优化为CGT；3）将步骤2）获得的基因片段克隆至表达载体、转化宿主菌使其表达。

5.一种发酵如权利要求3所述的宿主以表达权利要求1的MntC重组蛋白的方法，包括将一定量的种子菌接种于含有甘油和一定溶氧量的发酵培养基中，经诱导剂诱导一定时间而发酵；优选地，所述发酵培养基选自动物源性TB、动物源性M9、植物源性TB或植物源性M9；优选地，所述种子菌的接种量是5%～15%，进一步优选为10%；优选地，所述发酵培养基中甘油量为5-15ml/L培养基，进一步优选为10ml/L培养基；优选地，所述发酵培养基中溶氧量是25%～65%，进一步优选为45%；优选地，所述发酵诱导剂是乳糖或IPTG；优选地，所述诱导剂的浓度是0.1～1mM，进一步优选为0.2mM；优选地，所述诱导温度为16～37℃，进一优选为30℃；优选地，诱导时间为1～6小时，进一步优选为5小时。

6.一种在发酵如权利要求3所述的宿主后纯化如权利要求1所述的MntC重组蛋白的方法，包括依次进行亲和层析、阳离子交换层析、脱盐、脱内毒素；优选地，在进行亲和层析之前，需要对宿主破菌，以将蛋白从菌体中释放出来；优选地，所述亲和层析为GST亲和层析结合Prescission蛋白酶酶切，进一步优选地，所述GST亲和层析为GST琼脂糖凝胶4B层析；优选地，所述阳离子交换层析是MMC层析，进一步优选地，所述MMC层析使用的缓冲液包括：缓冲液A:10-20mM His，0.01%泊洛沙姆188,pH6.0；缓冲液B:10-20mM His，0.01%泊洛沙姆188，1M NaCl,pH6.0；优选地，所述洗脱缓冲液的洗脱程序是以0-100%洗脱缓冲液B，5-10个柱体积进行梯度洗脱；优选地，所述脱盐使用G25柱；优选地，所述脱内毒素使用Q HP柱。

7.根据权利要求1所述的MntC重组蛋白在制备检测、预防或治疗SA感染的制剂中的应用；优选地，所述制剂是疫苗。

8.包括如权利要求1所述的蛋白或权利要求2所述的核苷酸序列或权利要求3所述的载体或宿主的试剂盒或组合物。

9.由权利要求1所述的MntC重组蛋白免疫产生的抗体。

10.根据权利要求9所述的抗体在制备用于检测、预防或治疗SA感染的制剂中的应用。