[发明专利]一种耐超高温液化淀粉酶的制备方法

权利要求书

1. 一种耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步聚1，琼脂培养基接种培养：（1）琼脂培养基准备：培养基配方为，胰蛋白胨1.0-1.5％，酵母膏0.5-0.7％，NaCl 0.9-1.1％，琼脂1.8-2.1％，可溶性淀粉0.25-0.30％, pH6.5-7.0，其余为水；将所述配料混匀后，放于培养皿中，0.09-0.11MPa MPa灭菌30-35min，冷却到室温，制成琼脂复壮培养基,备用；（2）接种与培养：将保存的地衣芽孢杆菌环移取1-2环放于每个培养皿的琼脂培养基上，置于36℃±1℃恒温培养60-70h，取出保存，制成琼脂培养基菌种；

步聚2，扩大培养：（1）扩大培养基配方：胰蛋白胨1.0-1.5％，酵母膏0.5-0.7％，NaC1 0.9-1.1％，可溶性淀粉0.25-0.30％,pH6.5-7.0，其余为水；0.09-0.11MPa，灭菌30-35min，冷却至39-41℃，制成扩大培养基，备用；（2）扩大培养方法：取步聚1制成的琼脂培养基菌种，按扩大培养基重0.8%的接种量，接种到冷却至39-41℃的扩大培养基，36℃±1℃恒温培养60-70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300-320转/分钟，通风量为1.3-1.5立方气体/升扩大培养基/分钟，制成扩大培养液；

步聚3，液态发酵制备：（1）液态发酵培养基配方：(NH₄)S0₄0.22-0.27％，KH₂PO₄ 0.30-0.37％，CaC1₂0.015-0.02％，可溶性淀粉0.25-0.30％，胰蛋白胨0.35-0.45％,玉米粉2.9-3.5%，pH6.5-7.0，其余为水；0.09-0.11MPa MPa灭菌30-35min，冷却至39-41℃，制成液态发酵培养基，备用；(2)液态发酵培养：取步聚2制成的扩大培养液，按液态发酵培养基重2.5-3.5%的接种量，接种到冷却至39-41℃的液态发酵培养基，36℃±1℃恒温培养60-70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300-350转/分钟，通风量为1.3-1.5立方气体/升培养基/分钟，制成液态发酵液；

步聚4，粗滤：往步聚3制成的液态发酵液中添加相当于液态发酵液重4-6%的硅藻土，混合均匀，板框压滤，得粗滤液；

步聚5，膜浓缩：以微滤膜将步聚4所得粗滤液过滤浓缩至原粗滤液的1/4-1/5,在5-25℃下保存。

2.如权利要求1所述耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，步聚1中，琼脂复壮培养基的灭菌压力为0.1MPa。

3.如权利要求1或2所述耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，步聚2中，扩大培养基灭菌的压力0.1MPa，冷却至40℃。

4.如权利要求1或2所述耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，步聚3中，液态发酵培养基的灭菌压力为0.1MPa MPa，冷却至40℃。