[发明专利]PP2A拮抗剂在制备治疗急性肝损伤药物中的应用

说明书

技术领域

.本发明涉及PP2A在急性肝损伤药物治疗中的应用，尤其涉及PP2A拮抗剂在制备治疗急性肝损伤药物中的用途。

背景技术

.肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，起着解毒，去氧化，储存肝糖元，分泌性蛋白质的合成等作用。在体内有大概70%的血液流经肝脏，因此肝脏是口服类药物、酒精等经肠道吸收的外源性物质的必经场所，从而使得肝脏成为对化学性损害极其敏感的器官。

.药物诱导型肝损伤导致的疾病范围很广，包括肝中毒，肝细胞病变，急性脂肪病变，肝炎，胆汁郁积，肝性肉芽肿，脂肪性肝炎，肝癌等。药物诱导型肝损伤的程度也不一而足。由于环境污染的加剧，饮酒过多等因素，在我国，化学性肝损伤患病人数最为广泛。而肝损伤若任其恶化发展，最终会转变为肝硬化，甚至恶化为肝癌，最终无法挽救。因此，尽量避免接触生活中的化学性毒物、医源性药物和过量喝酒，尽早开展相关治疗，对于防范与治疗肝损伤相关疾病意义重大。

.肝脏在应对急性化学性肝损伤时，表现的肝再生、细胞外基质积累、炎症细胞侵润等均是是由多细胞共同参与调控的。在急性肝损伤后，肝星状细胞受到刺激因子后激活为肌成纤维细胞样细胞，分泌肝细胞生长因子（HGF）促进肝实质细胞的再生，同时产生大量的细胞外基质不仅可以作为肝实质细胞生长的支架，当损伤得到控制后，多余累积的细胞外基质会被吸收，而激活的肝星状细胞则会重新回到静息期或是凋亡清除，否则会引起肝纤维化，若不加控制最终会形成肝硬化，乃至肝癌。静止期的肝细胞受到刺激通过代偿性增生的方式进行一到两次复制使肝脏恢复到原始大小，这一过程也称为肝再生。而在分子水平上，肝星状细胞激活的标志主要为α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与胶原（Collagen1）等基因的上调与表达。

.PP2A是一种在进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由PP2A基因所表达调控。在细胞中，蛋白质动态的磷酸化与去磷酸化是信号转导的基本机制，PP2A正是通过去磷酸化的功能使底物蛋白失活或激活，从而引起细胞中的一系列变化。PP2A全酶是由65-kDa的结构亚基（A亚基）、36-kDa的催化亚基（C亚基）和多样性的调节亚基（B亚基）构成。

.敲除PP2A全酶当中的催化亚基（C亚基）的Cα亚基会使得整个PP2A失去其去磷酸化的酶活作用。PP2A主要与细胞周期调控，细胞凋亡等生化进程相关，但经发明人研究其亦可对急性肝损伤过程产生调控作用。

发明内容

.有鉴于此，本发明的目的在于通过构建Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒，考察PP2A基因在急性肝损伤细胞模型、构建PP2A基因敲除动物模型和临床肝损伤病人肝脏中的表达状况与功能活性，确认PP2A能否作为急性肝损伤治疗的药物靶点。以及通过急性肝损伤细胞模型和PP2A基因敲除动物模型来检测其拮抗剂是否是有效的治疗药物，提出利用Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒来进行急性肝损伤的治疗，从而提高急性肝损伤患者的治疗效果及生命质量。

.为达上述目的，发明人考察了PP2A在CCL4损伤肝细胞模型、急性化学性肝损伤动物模型与肝损伤患者组织检测表达变化，同时调查了Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒对肝损伤的影响以及对肝细胞增殖影响。结果发现PP2A在化学性肝损伤模型以及肝硬化患者组织中表达量都有显著上调。干扰PP2Acα（PP2A的催化亚基，决定PP2A的功能）后，肝实质细胞中与增殖相关的细胞周期蛋白（cyclin D）表达量显著增加，这代表着损伤的修复和损伤程度的减轻。同时在急性性肝损伤动物模型中，发现敲除PP2A有助于减降低Collagen1的表达，这代表着损伤程度的减轻。以上结果均提示我们，Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒可以用来进行急性肝损伤的治疗。

.本发明治疗急性肝损伤的药物施用方式可以是口服、特定组织器官施用、全身施用（例如，透过皮肤、鼻吸入或者用栓剂）或肠胃外施用（例如，肌肉内、静脉内或皮下）。

.本发明的药物也可被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物，可通过常规方法进行制备。针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。

.本发明中，所述的小干扰RNA是对应的靶标序列为序列表中SEQ ID NO:1或2的DNA靶序列的小干扰RNA（SEQ ID NO:3或4），对照组序列为序列表中SEQ ID NO:11的RNA序列。