[发明专利]缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶基因序列及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，涉及缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶基因序列及其应用。

背景技术

能源是人类社会发展的基础，目前全球正面临着能源危机，石油资源供应紧张。由于生物能源的可再生性，生物能源的开发越来越受到关注，而微藻生物柴油以其不与人争粮、不与粮争地、不与畜争料的独特优势吸引了越来越多科研工作者的关注。

不同种类的微藻合成三酰甘油（triacylglycerol，TAG）的能力各不相同。研究发现，绿藻、硅藻等真核微藻的油脂含量比较高，有希望成为生物柴油的生产藻种。缺刻缘绿藻（Myrmecia incisa Reisigl H4301）是一种淡水单细胞微藻，隶属绿藻门（Chlorophyta），该藻能大量积累TAG，尤其是在缺氮条件下，是潜在的微藻生物柴油藻种。

TAG是植物中最主要的贮存脂质，对植物的生长发育也起着重要作用。目前已经发现TAG的合成酶有二酰甘油酰基转移酶（DGAT；EC 2.3.1.20）、磷脂：二酰甘油酰基转移酶（PDAT；EC 2.3.1.158）和二酰甘油转酰基酶（DGTA）。其中，DGAT是TAG合成的最主要酶，它沿着Kennedy途径催化TAG合成的最后一步，也是该合成途径中唯一的限速酶。到目前为止，发现DGAT有三个家族，分别为DGAT1、DGAT2和DGAT3。

中国期刊《上海海洋大学学报》，2012年9月，第21卷第5期，刊出的论文“缺刻缘绿藻转录组测序及脂质代谢相关基因注释”，该论文作者为了能深入地了解缺刻缘绿藻花生四烯酸和脂质的代谢过程，利用Roche 454 GS FLX测序仪对该藻转录组进行高通量的焦磷酸测序，得到高质量读序（read）382468条，占原始读序的97.14%，平均每条读序长322bp，总大小达123Mb，再经CAP3软件拼接得到22714条重叠群、25621条singleton。将这些序列与公共数据库进行同源性搜索、比较、基因功能注释和分类，并基于转录组中所注释的基因构建了缺刻缘绿藻脂质代谢途径。但是该论文并未披露缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶的cDNA序列，而且本领域技术人员均知，高通量测序方法存在误差，测出的cDNA序列并非100%准确，存在误差的可能性极大，因此根据该论文本领域技术人员也难以得出准确的缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶基因序列。

中国专利文献CN201210477507.7，公开日2013.02.27，发明名称为“一种编码缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶的DNA序列及其应用”，基于缺刻缘绿藻转录组测序数据，筛选获得了一种缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶（MiDGAT2）基因的cDNA全长序列，通过同源比对分析确定该酶为DAGT2基因家族，并进一步获得了MiDGAT2的DNA全长序列，然后通过将该MiDGAT2在酵母的TAG合成缺陷株H1246中表达，证实该基因编码蛋白确实具有TAG的合成能力。而缺刻缘绿藻是一种真核藻类，其内可能并不只包含一种二酰甘油酰基转移酶，而可能是由多个同工酶来催化TAG的合成。同工酶（Isozyme／Isoenzyme）是指性质不同（Vmax和／或Km不同）但催化反应相同的酶，又称为同功异构酶。它们可以以不同的量出现在一种生物的不同组织或器官中，也可以出现在任何真核生物细胞不同的细胞器。其差异可以是在蛋白质的一级结构上，也可以是在四级结构或翻译后加工上。其存在可被细胞用来根据细胞内特定的生理状况而对酶活性进行调节。同工酶是基因分化的产物，而基因的分化又是生物进化过程中为适应愈趋复杂的代谢而引起的一种分子进化，以适应不同组织或不同细胞器在代谢上的不同需要，是基因编码的蛋白质表现型。因此，发现并研究缺刻缘绿藻的其它二酰甘油酰基转移酶及其基因序列，对于研究缺刻缘绿藻的物种进化、遗传变异等具有重要的意义，同时也将为通过基因工程方法合成TAG提供新的途径。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种多肽。

本发明的再一的目的是，提供一种分离的核苷酸序列。

本发明的另一的目的是，提供一种重组表达载体。

本发明的第四个目的是，提供一种基因工程化的宿主细胞。

本发明的第五个目的是，提供上述多肽、核苷酸序列、重组表达载体或宿主细胞的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种多肽，所述的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种分离的核苷酸序列，其特征在于，所述的核苷酸序列包括：