[发明专利]一种中华鳖脂肪酸分析方法

权利要求书

1.一种中华鳖脂肪酸分析方法，包括以下步骤：

（1）中华鳖宰杀后取脂肪组织10 g， -18 ℃保存；

（2）称取甲鱼脂肪1 g，碾碎后放入10 mL玻璃试管中，加入10 mL提取液，混匀后密封浸提24 h；

提取完成后，用不含脂肪的滤纸过滤，再加入5 mL提取液冲洗残渣，2次滤液合并保存；所述提取液为体积比为2:1的氯仿：甲醇；

（3）取脂肪提取液5 mL，加入3 mL 10% KOH甲醇溶液，混匀后，置于80 ℃水浴反应1 h；室温冷却后，加入3 mL 14% BF₃甲醇溶液 (v/v)混匀后，于50 ℃水浴反应10 min；冷却后，加入3 mL正己烷，震荡涡旋，室温静置过夜；取上层正己烷层至进样小瓶，-18 ℃冷冻，待GC-MS分析；

（4）将进样瓶中的脂肪酸甲酯进行气相色谱质谱分析，色谱条件：色谱柱为安捷伦DB-5MS石英毛细管柱30.0 m×0.25 mm×0.25 μm；载气为高纯氦气；流速1 mL/min；程序升温：60 ℃保持1 min，以10 ℃/min 升至160 ℃并保持4 min，以5℃/min升至260 ℃并保持5min，以5 ℃/min升至280 ℃并保持1 min；分流比20:1；进样量1 μL；质谱条件：EI离子源；电子能量70 eV；离子源温度220 ℃；进样口温度240℃，质量扫描范围：m/z 40~600；溶剂切除时间2.5 min。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在进行气相色谱质谱分析之后，还包括对分析的脂肪酸甲酯计算保留指数进行计算的步骤：

（1）将正构烷烃混合标准品C8-C40以脂肪酸甲酯分析的条件进行气相色谱质谱分析；

（2）记录每个正构烷烃标准品的保留时间；采用保留指数的线性升温公式：                                                计算各组分的RI值，其中：t_x、t_n和t_(n+1)分别为被分析组分和碳原子数处于n和n+1之间的正构烷烃混标标准品的流出峰保留时间（min）；

（3）根据http://webbook.nist.gov/chemistry/ 搜索文献得相应色谱柱各脂肪酸甲酯的保留指数RI，结合质谱库检索，同时运用面积归一化法计算各脂肪酸的相对百分含量。