[发明专利]猪伪狂犬病变异株gE和gI基因缺失病毒株及其应用

说明书

技术领域    

本发明涉及猪伪狂犬病毒技术领域，特别涉及一种猪伪狂犬病变异株gE和gI基因缺失病毒株，还涉及所述病毒株的应用。

背景技术   

猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科成员，可引起新生仔猪中枢神经系统紊乱，生长猪呼吸道症状，并能导致妊娠母猪流产、死胎与弱仔。美国与部分欧洲国家已宣布消灭和根除该病。我国广泛使用该病基因缺失弱毒疫苗有效控制并逐步净化。

华中农业大学在2005年申请了一个公开号为CN1940063A，名称为“一种伪狂犬病E^-/gI^-基因缺失毒株、含有该毒株的灭活疫苗及应用”，公开了保藏号为CCTCC-V200511的伪狂犬病毒基因工程株WKQ-001，该毒株缺失了PrV的糖蛋白基因gI、gE，作为标志基因，用于鉴别和诊断人工免疫猪及自然感染猪，还可用于制备灭活疫苗，其疫苗的免疫保护效果，尚待提高。 

发明内容   

为了解决以上现有技术中猪伪狂犬病毒疫苗不能抵抗高毒力抗原变异流行毒株感染等问题，本发明提供了一种可用于制备免疫效率高的疫苗的猪伪狂犬病gE和gI基因缺失病毒株。

本发明还提供了所述的猪伪狂犬病gE和gI基因缺失病毒株在制备免疫力高的疫苗中的应用。 

本发明是通过以下措施实现的： 

一种猪伪狂犬病高毒力抗原变异株gE和gI基因缺失病毒株（Pseudorabies virus）PRV-ZJ011G，其保藏号为CGMCC No.7957。

所述的猪伪狂犬病gE和gI基因缺失病毒株PRV-ZJ011G在制备疫苗中的应用。 

所述的应用中，疫苗为水包油型灭活疫苗。 

所述的应用中，疫苗的制备过程为：取含有PRV-ZJ011G病毒的病毒液，甲醛灭活，加入佐剂乳化即得。 

所述的应用中，病毒液与佐剂的重量比为4:1。 

所述的应用，病毒液中病毒含量为10^7.0TCID₅₀/mL。 

所述的应用，疫苗中病毒抗原含量大于10^6.0TCID₅₀/mL。 

本发明的有益效果： 

从我国发病猪群分离的猪伪狂犬病毒（PRV）毒株PRV-ZJ01，通过DNA同源重组将携带细菌人工染色体（BAC）载体和gfp表达盒pHA2质粒插入到ZJ01毒株的US7与US8基因内，获得了gE与gI基因缺失的重组病毒PRV-ZJ011G（以下也简称为ZJ011G）。提取该重组病毒的环状基因组DNA，电转化至大肠杆菌DH10B，筛选获得病毒感染性克隆PRV BAC（pZJ01/G-7）。将pZJ01/G-7转染BHK-21细胞可以重新启动病毒的生产性感染。重组病毒PRV-ZJ011G引起的细胞病变、病毒生长曲线和体外增殖特性与ZJ01毒株一致。

将10^6.0 TCID₅₀重组病毒接种新西兰大白兔，未引起瘙痒等临床症状。采用PRV-ZJ011G株病毒液（10^6.0TCID₅₀/mL）灭活处理制成水包油型灭活疫苗，与Bartha-K61活疫苗进行猪体免疫保护试验，结果表明，PRV-ZJ011G毒株灭活疫苗安全性较好，免疫后4周可产生gB抗体，但gE抗体阴性。采用ZJ01病毒液（10^6.0TCID₅₀）攻击，PRV-ZJ011G灭活疫苗组免疫保护效率100%，Bartha-K61活疫苗组保护效率40%，证明PRV-ZJ011G重组病毒具有较好免疫原性，可用于疫苗制备。 

菌株保藏信息

保藏时间：2013年9月18日，

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），

保藏编号：CGMCC No.7957，

保藏单位地址：中国科学院微生物研究所，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，

分类命名：猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus）。

附图说明