[发明专利]稻瘟病抗性基因Pi63的功能特异性分子标记及其方法与应用

权利要求书

1.稻瘟病抗性基因Pi63的功能特异性分子标记YRT3或YRT4，其特征在于：分子标记YRT3是通过正向引物如SEQ ID NO. 1所示序列和反向引物如SEQ ID NO. 2所示序列从水稻总DNA中扩增出来的核苷酸序列，并经特异性酶切后再电泳检测到的与稻瘟病抗性基因Pi63呈特异性带型的分子标记；分子标记YRT4是通过正向引物如SEQ ID NO. 3所示序列和反向引物如SEQ ID NO. 4所示序列从水稻总DNA中扩增出来的核苷酸序列，经直接电泳检测到的与稻瘟病抗性基因Pi63呈特异性带型的分子标记；

其中，所述的水稻为水稻品种为羊毛谷（YMG）。

2.根据权利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子标记YRT3或YRT4，其特征在于：所述的稻瘟病抗性基因Pi63的DNA序列如SEQ ID NO. 5所示，所述的稻瘟病抗性基因Pi63的氨基酸序列如SEQ ID NO. 7所示。

3.根据权利要求1所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子标记YRT3或YRT4，其特征在于：通过引物对SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2从水稻总DNA中扩增出来的PCR产物大小为1449 bp，并经特异性酶AseI酶切后成为2个片段，大小为908 bp和541bp；通过引物对SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO.4从水稻总DNA中扩增出来的PCR产物大小为421 bp。

4.一种利用权利要求1～3任一项所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子标记YRT3或YRT4鉴别或筛选含有稻瘟病抗性基因Pi63的水稻品种的方法，其特征在于：

以待测水稻植株或品种的总DNA为模板，采用如SEQ ID NO.1和 2所示序列的引物对进行PCR扩增，如果得到的扩增产物大小为1449 bp，并经特异性酶AseI酶切后成为2个片段，大小为908 bp和541bp，则待测水稻植株或品种含有稻瘟病抗性基因Pi63；或

以待测水稻植株或品种的总DNA为模板，采用如SEQ ID NO.3和 4所示序列的引物对进行PCR扩增，如果得到的扩增产物大小为421 bp，则待测水稻植株或品种含有稻瘟病抗性基因Pi63。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：采用如SEQ ID NO.1和 2所示序列的引物对进行PCR扩增，所述的PCR扩增，其中扩增产物A的PCR反应体系如下：2× PCR Buffer for KOD FX 10 μl， dNTPs (2 mM each) 4 μl，引物 (1 0pmol, F+R) 1 μl， KOD FX酶（1 U/μl, TOYOBO）0.4 μl，DNA模板（100 ng/μl）2 μl，加ddH₂O至20 μl，扩增反应条件：94℃ 2 min；98℃ 10 s → 59℃ 1.5 min → 68℃ 5 min，35个循环； 68℃ 5 min，10℃保存；采用如SEQ ID NO.3和 4所示序列的引物对进行PCR扩增， PCR反应体系如下：2 × PCR Buffer for KOD FX 10 μl，2mM dNTPs 4 μl，10pmol引物1 μl，1U/μl KOD FX酶0.4 μl，100ng/μl DNA模板2 μl，加ddH₂O至20 μl，扩增反应条件：94℃ 2 min；98℃ 10 s → 59℃ 40 s → 68℃ 5 min，35个循环；68℃ 5 min，10℃保存。

6.权利要求1～3任一项所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子标记YRT3或YRT4的应用，其特征在于：利用所述的稻瘟病抗性基因Pi63的功能性分子标记YRT3或YRT4在分子标记辅助育种、基因聚合育种以及转基因育种中的应用。