[发明专利]多种癌症病理演变前期Bmi1基因mRNA水平的原位杂交检测试剂盒及检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地说，是涉及与癌症病理演变前期mRNA表达改变(病理演变过程中)的相关检测技术。

背景技术

   根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数已达到312万，死亡人数近260万，患者超过700多万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800多万，患者约有8400多万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。癌症诊治成本越来越高，按癌症患者的年治疗费用20万（贫穷地区可能偏高，发达地区可能远远高出20万），700多万患者，每年的花费是1.4万亿人民币，扣除成本35%约4千亿，每年约有1万亿人民币白白消耗了。而且，癌症患者大部分会在治疗后不久死亡。因此，现有的临床癌症诊治模式一定要改变，本发明的创新点是提前做到预防性筛查，在瘤块没有出现之前筛查Bmi1基因的mRNA表达量，对表达量降低者，及时介入预防性调控和预防性治疗，做到基因水平癌症的治未病。

   2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等八家单位做了 抗癌大战中是失败，结论是癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1.肿瘤细胞异质性（多态性）；2.肿瘤细胞耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善（动物模型设计不科学）等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。

   本发明人在长期研究中发现，导致癌症死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期诊断。依照现有的临床医学影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖类激素、细胞膜因子、细胞核因子、细胞流式技术）指标来诊断癌症，都是肿瘤形成后诊断，前者要有组织学变化或已有占位性病变，后者大部分是肿瘤形成后所分泌、释放、或肿瘤的标记物。传统临床观念认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断，这一概念值得认真讨论，2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度来分析，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从多种癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很难证实的是在这个病理演变过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶，可能癌细胞早已迁移到其它组织或器官生长。临床研究早已证实，一旦形成肿块的同时，其它癌细胞通过不同途径迁移到其它部位克隆生长，一旦切除原发灶后，其它器官复发灶或多发癌块灶先后形成。因此，在临床上以2公分以下的癌肿块大小来界定早期与否，不够严谨（有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中），其实这时已经是晚期诊断和晚期治疗，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

   随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，为了寻求更早期的诊断癌症、治疗癌症、以及预防癌症，已取得长足进步。至今，我们已有可能在基因的一级转录功能产物（mRNA水平或microRNA）上做更精确的早期筛查和诊断，在多种癌变前期或癌细胞形成（单克隆）前,就可以做到早期预测和筛查。

   研证实Bmi1是一个新的原癌基因，在各种癌症组织高度表达，是癌症发生和转移的因子，Bmi1的高表达与各种癌症的进程、复发和预后显著相关，表明了Bmi1是一个潜在的各种癌症病变前期及预后有非常重要意义的标记物。

本发明选择多组临床标本（癌症病人、高危人群、正常对照）采用核酸原位杂交技术和免疫组化方法对Bmi1基因mRNA乳腺癌的早期预警进行检测分析。本发明人在研究中发现Bmi1基因mRNA在乳腺癌患者、癌症高危人群、正常对照人有明显的表达量变化，将Bmi1基因mRNA作为各种癌变病理变化前期筛查指标，有非常重要的临床诊断意义。作于多种癌变前期筛查、及癌症治疗后的复发、转移预警也有非常重要的临床意义。

发明人在长期的研究中，得出了一种新理念，癌症和其它临床的重大疾病的临床诊治模式一定要改变，不能只停留现有治已病（发病后诊治），要做到预防性诊治，做到治未病，只有这样才能降低重大疾病的发病率和死亡率，降低社会成本和医疗成本。因此，发明人在开发和生产重大疾病的RNA水平筛查试剂盒及治疗药物中，在理论和技术上都做了创新。特别是筛选临床标本（正常人群、癌症高危人群、肿瘤患者），突破了正常组织与肿瘤组织比较的一贯性研发思路，来寻找和开发癌前变的RNA水平，与癌症早期基因病理生理学演变密切相关，而且临床意义非常重要靶标（疾病基因），将临床上肿瘤形成后诊治模式提高到肿瘤的预防性诊治，争取了肿瘤诊治的时间和空间，达到预防癌症。