[发明专利]一种离体快繁短月藓配子体的方法及其培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种利用植物组织培养技术进行离体快繁短月藓配子体的方法。

背景技术

短月藓（Brachymenium nepalense Hook.）是隶属于真藓科（Bryaceae）的短月藓属（Brachymenium Schwaegr.）苔藓植物。植物体多强壮，中等大小，群集纵生，茎叶无或略具光泽，黄绿色至深绿色。茎直立，新生枝多数，高可达2cm（我国北方约1cm，因环境不同变化较大）。基部具红褐色假根，叶多丛集生于枝的顶端，呈莲座状。下部叶稀而小。干时皱缩，紧密螺旋于茎上。叶呈长圆状舌形、长圆状匙形或卵状长圆形，渐尖，除上部边缘扁平具齿外，叶多全缘背卷；中肋粗壮，贯顶呈长芒状，下部及叶基部呈红褐色。

苔藓植物由于结构简单，吸附力强，易对污染物做出反应。有关研究表明，苔藓类植物对大气环境污染因子的反应敏感程度是种子植物的10倍，苔藓植物会积累和集中有毒物质，即使有毒物质在环境中存在浓度很低。1968年，在荷兰召开的第一届关于大气污染对于动植物影响的欧洲会议上，苔藓植物因处理简单、对空气污染物敏感等优点被推荐作为污染的指示生物。目前，如何利用苔藓植物指示监测和研究环境重金属的沉降污染问题，已成为国际上环境科学研究的一个热点。

近年来，国内有关利用苔藓植物进行园林绿化和造景的研究正方兴未艾。追溯苔藓绿化的历史，日本园林中苔藓植物的应用可以追溯到奈良时代（公元12世纪。目前，仍保留各类苔藓庭院数十处（主要在京都地区）。西芳寺是日本历史最悠久的苔藓公园；美国的苔藓绿化历史可以追溯到1930年代，到1987年已经有人拥有1英亩以上的苔藓园了；英国在20世纪70年代建成了有37种苔藓植物的庭院；荷兰1982年建成了有57种苔藓的庭院。而我国目前还尚未有成形的苔藓园。

短月藓（Brachymenium nepalense Hook.）植株体较大，株型美观，分布广泛，易于采集。因此无论是利用它作为指示环境污染的指示植物还是作为园林绿化用苔藓均具有明显优势。

通过组织培养方式，建立短月藓快繁系统，既可以为利用短月藓指示和监测大气污染提供理想的试验材料，也可以为应用短月藓进行园林绿化和造景提供丰富种源。目前现有技术中还没有关于短月藓在培养瓶内大量扩繁配子体的培养技术，也没有通过利用短月藓孢蒴离体培养获得配子体的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用植物组织培养技术离体快繁短月藓配子体的方法，以填补现有技术的空白，实现人工大量快速扩繁短月藓配子体。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种离体快繁短月藓配子体的方法，包括以下步骤：

1)将生长于自然环境中的短月藓孢蒴表面消毒后，接种到无任何激素的改良Knop′s培养基上，用无菌器械破碎孢蒴使孢子释放，培养10天，孢子萌发产生原丝体，筛选获得无菌原丝体，再培养30天，经初生原丝体生长获得较多原丝体；

2)将步骤1)得到的无菌原丝体转接到诱导配子体产生的培养基上培养30天，获得配子体，高度约为0.3cm；

3)将步骤2)诱导培养得到的配子体接种到配子体增殖扩繁的培养基上，培养30天，每个配子体可新生数量众多的新生配子体。

上述各步骤的培养条件为：温度23±2℃，光照强度2000lx，光照时间14小时/天。

步骤（1）中所述无任何激素的改良Knop′s培养基配方为：改良Knop′s基本培养基＋10g/L蔗糖＋6g/L琼脂粉。

步骤（2）中所述诱导配子体产生的培养基配方为：改良Knop′s基本培养基＋125mg/L KH₂PO₄＋10g/L蔗糖＋6g/L琼脂粉。