[发明专利]一种检测单增李斯特菌用核酸侧向流试纸条的制备方法及其应用

权利要求书

1.本发明提供一种食源性病原微生物-单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的试

纸条快速检测方法。

2.如权利要求1所述的检测方法，采用两条独特设计的引物PCR进行扩增反应，其中上游引物序列为LM-F：5′-Biotin-CCAAGATACAGAAACATCGGTT GG-3′，下游引物序列LM-R：5′-FITC-CTGAGTGTAATCTTGATGCCATCAG -3′，该引物对的5′端分别进行标记以便于检测。

3.如权利要求1所述的检测方法使用带有核酸变性剂的展开缓冲液完成试纸条上的层析，其成分为：10mM Tris、1% BSA、1% Tween 20以及浓度分别为0.05mol/L到0.5mol/L的NaOH。

4.权利要求1所述的用于核酸扩增产物检测的试纸条，其中有色颗粒是胶体金颗粒或乳胶颗粒，所述的纤维膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜。

5.如权利要求2所述的PCR过程，其引物对可以选择生物素分子（Biotin）、异硫氰酸荧光素（FITC）或地高辛（Digoxin）中两种不同的方法标记。

6.如权利要求2所述的PCR过程，其反应条件为：95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 sec；56.5 ℃退火  30 sec；72 ℃延伸    30sec，扩增30个循环，最后72 ℃延伸5 min。

7.权利要求1所述的PCR-免疫胶体金试纸条用于食源性病原微生物单增李斯特菌的扩增及通过免疫胶体金技术进行检测的用途。