[发明专利]具有耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂的生产方法

权利要求书

1.一种利用甘薯淀粉废水和菌糠废渣生产耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂的方法，其特征在于，该方法以甘薯淀粉废水和菌糠废渣为主要培养基原料，进行液态-固态联合发酵生产日本曲霉菌剂，，生产方法包括如下步骤。

2.根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的培养基配制如下：

菌种保藏固体培养基：蔗糖5 g，琼脂18-20 g，40 g马铃薯煮沸过滤成的浸出液，加甘薯淀粉废水定容至1L，自然pH；

菌种活化液体培养基：蔗糖5 g，40 g马铃薯煮沸过滤成的浸出液，加甘薯淀粉废水定容至1L，自然pH；

液体种子培养基：蛋白胨 10 g，葡萄糖 20 g，KH₂PO₄ 10 g，MgSO₄·7H₂O 5 g，加甘薯淀粉废水定容至10 L，自然pH；

液体发酵培养基：KH₂PO₄ 200 g，KH₂PO₄ 100 g，MgSO₄·7H₂O 20 g，加甘薯淀粉废水至200 L，自然pH；

以上培养基均在121℃灭菌15-30 min。

3.根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的菌种活化为：挑取日本曲霉菌至菌种保藏培养基，28℃连续划线、挑单菌落培养两次后，用无菌水配制孢子悬液，通过血球板计数法确定孢子悬液浓度为1.0×10⁸个孢子/mL，按5%（V/V）接种量挑取单菌落在菌种活化培养基中，于28℃，150 r/min摇床振荡培养4d。

4. 根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的液体种子制备：向装有高温灭菌的种子培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种日本曲霉菌，于25-30℃，通空气好氧培养48-72 h，得到液体种子。

5.根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的液态发酵：向装有高温灭菌的发酵培养基的发酵罐中，按照5％-10％的接种量接种日本曲霉菌液体种子，于25-30℃，通空气好氧培养48 - 72 h，得到活菌体培养物。

6.根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的固态发酵：以蘑菇渣为支持物，将培养好的液态种子或液态日本曲霉菌产物按照2.5-4倍重量添加到蘑菇渣物料中，搅拌均匀，于25-30℃，静态培养5-15天，得到固态日本曲霉菌产物。

7.根据权利要求1的日本曲霉菌剂的生产方法，所述的后处理：固态日本曲霉菌产物以分子孢子为主，将固态日本曲霉菌发酵产物经通风干燥处理，使其含水量小于30%，粉碎，包装，保存于干燥阴凉处。