[发明专利]一种检测中黑盲蝽抗药性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种对农业害虫抗药性进行监测的测定技术方法，具体地说，涉及一种检测中黑盲蝽抗药性的方法。

背景技术

近年来，随着转Bt基因棉在我国的大面积种植，棉铃虫得到了有效控制，但由于棉田中减少了化学药剂的使用，盲蝽蟓上升为主要害虫，同时由于农业产业结构调整，果树和蔬菜的种植面积大幅度增加，为盲蝽蟓提供了丰富的寄主植物和适宜的越冬场所，发生和危害日趋严重。盲蝽蟓的寄主范围非常广泛，有38科147种之多，其中主要有锦葵科、豆科、菊科、十字花科及多种果树林木等，在田间有转主危害的特征，且具有发生世代长、世代重叠严重的特点，在田间十分活跃，活动隐蔽，给防治带来了很大困难。目前对盲蝽蟓的防治仍以化学防治为主，但杀虫剂的短期使用会使盲蝽蟓产生亚致死效应，长期不合理使用会导致抗药性的发生，从而加大防治难度。

因此，如何快速、准确地检测盲蝽蟓抗药性水平是非常重要的。现在用于抗药性检测的方法主要包括传统的生物测定、生化检测、免疫学方法及分子生物学方法。通常情况下，生物测定最直接、最接近田间检测的抗性水平。

由于各种药剂作用机理的不同，短时间内昆虫的中毒反应也各不相同，因此利用这个特点发展的玻璃管药膜诊断剂量，能够快速检测田间种群的抗性水平，这一应用也是田间快速检测抗性的重要手段。

毒力测定是室内了解害虫抗药性常用的方法，但传统的叶片药膜法和点滴法进行毒力测定，操作繁琐，要设定若干浓度和重复，以保证结果的可信度。玻璃管药膜法是新出现的一种快速检测害虫抗药性的方法，由于其作用效果明显，缩短了检查结果的时间，但对于浓度和重复问题上仍然与传统方法一样，没有改进。利用本发明的诊断剂量，辅以玻璃管药膜法，不仅利用了玻璃管药膜法的快速检测特点，而且在诊断剂量下可快速了解害虫抗性，解决的传统毒力测定实验繁琐的程序，提高了效率，并可用于田间害虫抗药性的快速检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种使用简便，结果直观明了，适用于田间快速检测中黑盲蝽抗性水平的方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种检测中黑盲蝽抗药性的方法，在药剂的诊断剂量下制作诊断玻璃管，检测中黑盲蝽田间种群个体对药剂的抗性水平，所述药剂为吡虫啉、硫丹、三氟氯氰菊酯或毒死蜱；药剂的诊断剂量：吡虫啉为824ng/cm²，硫丹为20ng/cm²，三氟氯氰菊酯为861ng/cm²，毒死蜱为7ng/cm²。

其中，药剂的诊断剂量是通过不同浓度的药剂采用玻璃管药膜法对室内饲养中黑盲蝽敏感种群进行药剂毒力测定，计算LC₉₉作为药剂的诊断剂量。

上述中黑盲蝽敏感种群为室内饲养的未接触任何药剂的中黑盲蝽敏感种群。

进一步地，所述药剂的诊断剂量是通过如下步骤确定的：

（1）中黑盲蝽田间种群的室内饲养：采集中黑盲蝽田间种群，以新鲜四季豆为饲料，进行繁殖；

（2）丙酮稀释供试杀虫药剂至不同浓度梯度作为毒力测定浓度；

（3）玻璃管药膜的制作：用步骤（2）中丙酮稀释的各梯度药剂制作毒力测定所用的玻璃管药膜，每管加入220μL各浓度药液，滚动玻璃管使药液均匀吸附在玻璃管内壁上，直至丙酮完全挥发；

（4）毒力测定：用步骤（3）中制备的玻璃管进行中黑盲蝽的毒力测定，至少进行三次生物学重复；

（5）结果及诊断剂量：对步骤（4）的结果做毒力回归曲线，并计算LC₉₉得出各个药剂的诊断剂量。

其中，步骤（2）中所用的杀虫药剂均为95%以上的原药，并且用丙酮溶解，稀释至5～7个浓度梯度。

其中，步骤（4）中每次毒力测定实验做三次简单独立重复。

其中，步骤（5）用POLO软件计算结果及诊断剂量。

本发明的有益效果在于：

本发明方法使用简便，结果直观明了，适用于田间快速检测中黑盲蝽的抗性水平。利用本发明的诊断剂量进行田间抗性诊断，大大减少了传统毒力测定的繁琐步骤，可用于快速检测中黑盲蝽田间种群抗性水平，且用于田间的快速检测方便可靠，解决了传统毒力测定方法用虫量大的问题，也解决了田间操作问题，简单易操作，田间实时检测抗性，了解中黑盲蝽抗性水平，指导田间用药。

附图说明

图1为实验所用玻璃管。

图2为实验选用的供试中黑盲蝽。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1诊断剂量的获得