[发明专利]PEG修饰的甲基对硫磷水解酶及其应用

权利要求书

1.一类PEG修饰甲基对硫磷水解酶的制备方法，主要步骤为：

非特异氨基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液I进行溶解，调节pH至7-9，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和聚乙二醇修饰剂摩尔比为1∶5-1∶50。所述缓冲液I为0.02-0.2mol／LTris-Cl或磷酸盐缓冲液(PB)，pH7-9，恒温状态下，4℃-37℃进行修饰；

N端氨基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液II进行溶解，调节pH至4-6，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和修饰剂摩尔比为1∶1-1∶10；所述缓冲液II为0.02-0.2mol／L NaAc-HAc或磷酸盐缓冲液，pH4-6，恒温状态下，4℃-37℃进行修饰；

或，巯基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液III进行溶解，调节pH至7-9，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和修饰剂摩尔比为1∶1-1∶10；所述缓冲液III为0.02-0.2mol／L Tris-Cl或硼酸-硼砂缓冲液，pH7-9，恒温状态下，4℃-37℃进行修饰。

所述PEG修饰甲基对硫磷水解酶的方法中，非特异氨基修饰所用的聚乙二醇修饰剂为mPEG-SC5000、mPEG-SC10000、mPEG-SC20000；N端氨基修饰所用聚乙二醇修饰剂为mPEG-ALD5000、mPEG-ALD10000、mPEG-ALD20000；或，巯基修饰所用的聚乙二醇修饰剂为mPEG-MAL5000、mPEG-MAL10000、mPEG-MAL20000。

2.根据权利要求1所述PEG修饰甲基对硫磷水解酶的制备方法，其中，修饰时间为3-24小时。

3.根据权利要求1所述PEG修饰甲基对硫磷水解酶的制备方法，其中，修饰后的蛋白采用疏水层析、离子交换层析和凝胶过滤层析组合的方法进行不同修饰度产物纯化，层析柱为丁基疏水层析柱Butyl Sepharose6FF、阴阳离子交换层析柱CM／DEAE Sepharose6FF和Hiload superdex20016／60prep grade层析柱，流动相为0.05-0.2mol／L Tris-HCl或磷酸盐缓冲液或0.02-0.2mol／L NaAc-HAc，pH4-9，添加0-3M硫酸铵或者0-1.5M氯化钠。

4.根据权利要求3所述不同修饰度PEG修饰甲基对硫磷水解酶的纯化方法，其中，依据不同修饰度的PEG修饰甲基对硫磷水解酶的活性和稳定性结果进行组合，不同组分分别起到短期迅速起效和长效保持的作用。

5.根据权利要求4中的不同修饰度PEG修饰甲基对硫磷水解酶组合制成的农药降解剂，其特征在于活性和稳定性可控，且成本降低。此类农药降解剂可以浓缩液添加剂、崩解片或干粉形式，用于清洗水果和蔬菜表面残留农药、在农产品加工或中药原材料、茶叶加工过程去除残留农药、或者土壤修复等多个方面。