[发明专利]一种链霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测用试剂盒，特别是用于检测链霉素的化学发光试剂盒。

背景技术

随着现代经济的迅速发展，现代养殖业近年来也迅速发展，由此引起的抗生素的滥用导致的大量药物残留已经成为威胁人类健康的严重经济社会问题。动物源性食品中抗菌素污染的问题已引起全世界广泛关注，许多国家均对各种动物源性食品中的抗菌素残留提出限量标准。我国农业部在2002年公告的《关于动物性食品中兽药最高残留限量的通知》中，规定了92种动物性食品中兽药最高残留限量，其中链霉素(Tylosin)在鸡、猪、牛的肌肉、脂肪、肝、肾组织中的最高残留限量为200 μg／kg。链霉素对革兰阳性菌、革兰阴性菌、类菌介质和某些病毒有抑制作用，尤其对禽败血支原体、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌极其有效。链霉素主要通过抑制细菌细胞内蛋白质的合成而发挥作用随着其广泛应用，在动物性食品中的残留问题也日益突出。

因此残留检测方法是非常有必要的，很多国家已经为此而建立了一些药物残留的监测方法。包括传统的仪器法，微生物检测法和新兴的酶联免疫检测法(ELISA)。传统检测药物残留的仪器分析方法包括HPLC、LC-UV、LC-Ms和LC-MS-MS等。这些方法优点是准确、稳定、特异性好，可以作为标准方法，但仪器设备昂贵，笨重，需要大量的溶剂，对操作人员要求很高，样品前处理复杂、费时、费力、不易普及，不适合对大规模的样品进行即时检测。微生物检测法虽然可以进行大量样品的即时检测，但是特异性差，不能进行准确的定性定量分析。酶联免疫检测法(ELISA)克服了以上方法的缺点，是一种快速、灵敏、方便的检测方法，可以用于大量样品的即时检测，有着广阔的发展前景。在酶联免疫基础上结合化学发光分析的酶联免疫检测法(CL—ELISA)，有着更高的灵敏度，更宽的线性范围，更适合药物残留检测。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种具备较高的灵敏度、特异性、而且具有较高的反应速度的一种链霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种链霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂，所述酶标板的各孔包被有以链霉素药物与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；所述试剂包括：链霉素单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、链霉素系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；酶标板选择乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板，酶标板的各孔包被有以链霉素与卵清蛋白偶联制成的包被抗原。

其中所述包被抗原浓度优选1.5ug/mL，所述链霉素系列标准溶液从链霉素纯品中稀释得到，所用稀释液为含有10%甲醇的0.05mmol/L、pH-7.4的PBS，链霉素标准品浓度分别是0ng/mL，0.2ng/mL，0.4ng/mL，1.2ng/mL，3.6ng/mL和10.8ng/mL，所述百分比为体积百分比。

所述链霉素单克隆抗体是由链霉素药物与牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的单克隆抗体，其链霉素单克隆抗体是用人工免疫抗原免疫动物制得的单克隆抗体，将所得链霉素单克隆抗体用洗涤溶液稀释成1：60000的工作浓度。

所用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体为辣根过氧化酶一羊抗鼠IgG原液，使用时用洗涤溶液配制成1：3000的工作浓度。

所述化学发光溶液包括A液和B液，其中，A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001M PH-8.8的三（羟甲基）氨基甲烷溶液；B液为100mL含2.lg柠檬酸、2.82g无水Na₂HPO₄和0.64mL浓度0.75%的过氧化氢脲的溶液。

所述浓缩磷酸盐缓冲液由5.74g NaH₂PO₄·2H₂O和32.6g Na₂HPO₄·12H₂O溶于1L去离子水中制得。

所述浓缩洗涤液为按体积百分比在0.05%，pH为7.4，浓度为0.1mol/L的盐缓冲液中添加0.05%的吐温-20后制得。

所述的包被溶液为：1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中，并调节pH为9.5后制得，所述的封闭溶液为：10g OVA溶于1L洗涤溶液中，再加入重量百分比为0.02%的NaN₃后制得。