[发明专利]一种特利加压素及其杂质的超高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用超高效液相色谱分离分析特利加压素及其杂质的方法。

背景技术

特利加压素（Terlipressin）的结构为

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:1)，它是一种人工合成的长效血管加压素制剂，作为是一种前体药物，其本身无活性，在体内经氨基肽酶作用，脱去其N端的三个甘氨酰残基后，缓慢“释放”出有活性的赖氨酸加压素，后者可收缩内脏血管平滑肌、减少内脏血流量（如减少肠系膜、脾、子宫等的血流），从而减少了门静脉血流、降低了门静脉压，同时也可作用于食道和子宫等平滑肌。另一方面，特利加压素还可降低血浆肾素浓度，从而减少血管紧张素II的产生，减轻肾血管收缩，增加肝肾综合征患者的肾血流量，显著增加患者的肾小球滤过率，改善肾功能。目前，特利加压素主要用于严重急性食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃疡出血、慢性糜烂性胃炎或出血性胃炎，胰、胆和肠屡的辅助治疗以及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗，其在临床上使用的剂型一般为注射剂。

中国专利ZL200910110354.0公开了特利加压素的固相合成方法；中国专利CN102731625 A公开了一种纯化特利加压素的方法，其采用HPLC，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以高氯酸和硫酸水溶液的混合物为A相流动相，以乙腈为B相流动相进行梯度洗脱分离特利加压素，最后成盐得到特利加压素纯品；CN 1027754754 A公开了另一种分离特利加压素的方法，其首先以聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料的聚合物为固定相，以磷酸三乙胺缓冲液为A相流动相，以乙腈为B相流动相进行梯度洗脱，并再次以固定相为十八烷基键合硅胶的反相硅胶柱进行二次纯化，最终转盐得到纯品。由于其临床上多以注射剂型使用，因此，对特利加压素的纯度要求非常高，如何快速、高效地分离分析特利加压素的杂质对质量控制是非常必要的。

在ZL200910110354.0公开的特利加压素的固相合成过程中，存在几个关键步骤，这几个关键步骤可能导致最终产品中残留相应的中间体或杂质，其结构如下：

1）杂质A

Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:2)；

2)杂质B

Gly-Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:3)；

3）杂质C

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asp-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:4)；

4）杂质D

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:5)；

5）杂质E

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-Pro-Lys-Gly-Gly-NH₂(SEQ ID NO:6)；

6）杂质F

Gly-Gly-Gly-c[Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys]-D-Pro-Lys-Gly-NH₂(SEQ ID NO:7)。

上述化合物采用不同的色谱条件时，均可以单独的分离检测，但是选用多个色谱条件分别检测在人力物力上都存在极大的浪费。

以上杂质及特利加压素部分在结构上非常相似，但是从极性角度考虑，部分杂质与特利加压素却存在着较大极性差异，因此，在同一色谱柱上达到各组分的完全有效分离是非常困难的。为此，需要寻找一种既要求相似结构化合物以有效分离又兼顾不同极性能够有效检出的色谱条件。

发明内容

本发明在于提供一种分离分析特利加压素及各杂质的超高效液相色谱法，从而实现特利加压素与杂质的快速分离和分析测定。