[发明专利]兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及兔血清免疫球蛋白IgM、IgG、IgA液相悬浮芯片及其制备和应用。

背景技术

实验兔是目前生物医药产品研发及医学科学研究领域最常用的实验动物之一，尤其在生物抗体制备、眼科手术研究等方面发挥着大小鼠无法比拟的优势。血清免疫球蛋白Ig水平是反映动物机体免疫状态的重要指标，Ig含量的变化与疾病密切相关，其中IgG、IgM和IgA是介导体液免疫的主要效应分子。

液相悬浮芯片技术是可对多指标同时进行定性、定量的新型芯片技术，但是作为生物信息学先进的操作技术平台，液相芯片技术在生命科学基础研究领域的应用仍受限制。目前国外已推出了商品化的可应用于实验动物研究的液相芯片试剂盒，但只局限于大小鼠的检测，实验兔血清指标的检测，无法得到应用。

发明内容

为克服以上问题，本发明的目的在于提供一种兔血清免疫球蛋白IgM、IgG、IgA液相悬浮芯片。

一种兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片，包括分别和IgG、IgM和IgA捕获抗体偶联的42号、48号和57号微球。

另外，本发明还提供了一种兔血清免疫球蛋白IgM、IgG、IgA液相悬浮芯片的制备方法。

兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片的制备方法，包括如下步骤：

1）取100μl42号、48号和57号羧基微球进行活化；

2）活化后的42号、48号和57号微球分别与不同浓度的亲和纯化的IgG、IgM和IgA捕获抗体偶联，室温避光旋转偶联2h；

3）偶联完毕的微球用PBST洗涤，得到兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片。

其中，步骤1）为取100μl42号、48号和57号羧基微球，加80μl0.1MNaH2PO₄、10μl50mg/ml S-NHS和10μl50mg/ml EDC活化缓冲液，室温避光慢摇20min进行活化；所述步骤3）为偶联完毕的微球用0.05%PBST洗涤两遍后，加1ml1%PBSB室温避光封闭30min，用1%PBSB清洗微球一遍，去除上清，加入150μl1%PBSB保存微球，得到兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片。

另外，本发明还提供了使用兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片检测兔血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的应用及用液相悬浮芯片检测兔血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的方法。

兔血清免疫球蛋白液相悬浮芯片的使用方法，包括如下步骤：

（1）以100μl/孔1%PBSB润湿PVDF膜反应板，封闭10min，每孔分别加入偶联兔IgG、IgM和IgA的微球各1×104个，混合，抽滤弃去上清；

（2）反应孔加入50μl4倍稀释的兔血清样品，封膜，恒温孵育摇床500r/m室温避光反应60min；

（3）wash buffer洗3次，加入混合的IgG、IgM和IgA检测抗体，50μl/孔，500r/m室温避光反应60min，wash buffer洗3次，加入Streptavidin-PE抗体，50μl/孔，500r/m反应30min，抽滤弃去上清，用125μl1%PBSB重悬微球；

（4）在Bio-Plex200液相悬浮芯片系统上检测，液相悬浮芯片系统开机后须通过calibration kit和validation kit的激光光路校准，方可检测。

所述的方法采用荧光微球和悬浮芯片系统流式技术。

所述的检测对象为WHBE兔血清和JW兔血清。

所述的兔体重为2-2.5kg。

本发明制备兔IgG、IgM和IgA液相芯片，同步检测WHBE兔和JW兔血清中IgG、IgM和IgA含量，建立检测兔血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA液相悬浮芯片方法。建立检测兔血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA液相悬浮芯片的方法，可应用于免疫学和生物诊断试剂盒的研究开发，对生物医药产业的发展，尤其是为生物诊断试剂的研究开发和生产提供实验材料和新的资源。

本发明所用方法如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中所需要的材料或试剂，如无特殊说明均为市场购得。实施例中描述到的各种生物材料的取得途径仅是一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本发明生物材料来源的限制。所述百分比浓度若无特别说明均为质量/体积（W/V）百分比浓度或体积/体积（V/V）百分比浓度。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。