[发明专利]一种鉴定家鸭、番鸭和半番鸭的DNA标记方法

权利要求书

1.一种鉴定家鸭、番鸭和半番鸭的DNA标记方法，其特征在于：

在含SNP酶切位点的鸭MC1R基因编码区设计一对P1引物，引物序列为：

上游引物F：5'—CGTGCCCAACGA ACTCTT—3' ；

下游引物R：5'—CAGGGCGAA CATGTGGA—3' 。

2.一种鉴定家鸭、番鸭和半番鸭的DNA标记方法，其特征在于：其具体步骤包括：

（1）对鸭子采用颈静脉采血，EDTA抗凝，-20℃保存；基因组DNA试剂盒提取总DNA，端粒酶TE溶解，-20℃保存备用；

（2）利用已设计好的引物

上游引物：5'—GCCAGTGAGGGCAACCAG AG—3' ；

下游引物：5'—CTACCAGGAGCACAGCACCA—3'，分别对家鸭、番鸭和半番鸭的DNA进行扩增；产物回收、克隆并正反向测序；应用DNAStar中的SeqMan软件对测序结果进行比对，搜索SNP；

（3）引物的设计

在含SNP酶切位点的鸭MC1R基因编码区设计一对引物P1，上游引物F与下游引物R；

（4）PCR扩增

利用引物P1对番鸭、半番鸭和家鸭基因组DNA进行PCR扩增，PCR反应体系为: 2 × Taq MasterMix 12.5μL，上游引物F 1μL，下游引物R 1μL，模板 DNA 2μL ，补充ddH2O 至终体积25μL；PCR 反应条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 50 s，55.5℃ 35 s，72℃ 40 s，共 35 个循环；72 ℃ 10 min，4 ℃保存；PCR 产物经质量分数为 2% 的琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果；

（5）PCR-RFLP检测

取扩增产物5-6μL，加入限制性内切酶Hin6Ⅰ1μL，10×Buffer 1μL，加ddH₂O至终体积10μL，37℃酶切反应过夜，酶切产物用质量分数为3%的琼脂糖凝胶电泳检测，采用DL1000 DNA Marker作为分子量的标准对照，观察酶切结果，Bio-Rad凝胶成像系统观察拍照保存，由带型判断基因型；

（6）结果

利用引物P1对3类鸭群体进行扩增、克隆测序比对，发现A399G位于限制性酶切Hin6Ⅰ的识别位点，1个可用PCR-PFLP方法检测SNP的鸭MC1R基因标记，即为鉴定家鸭、番鸭和半番鸭的DNA标记方法。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定家鸭、番鸭和半番鸭的DNA标记方法，其特征在于：家鸭包括北京鸭、闽农白鸭、莆田黑鸭、山麻鸭、台湾白改鸭、卡其康贝尔鸭。